[发明专利]一种高纯度姬松茸多糖的制备方法

摘要

本发明公开了一种高纯度姬松茸多糖的制备方法，属于多糖制备技术领域。本发明将姬松茸粉碎，用氢氧化钠进行预处理后，加入混合酶液，反应后将反应液灭菌灭酶，离心得姬松茸提取液，加入聚丙烯酰胺、硫酸亚铁等除杂除色，再置于二氧化碳超临界萃取仪中进行萃取，得混合溶液，加入马来酸反应，过滤得到滤液，再加入四乙基氢氧化铵反应，并用液氮使溶液降温，经过滤、减压蒸馏、干燥得到高纯度姬松茸多糖。实例证明，本发明操作简便，反应条件温和，整个制备过程中无任何有机溶剂的加入，使得最终制得的姬松茸多糖得率达到了90％以上，纯度不低于95％，为姬松茸多糖在医药领域和保健品行业中的工业化开发奠定了基础。

主权项

一种高纯度姬松茸多糖的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：（1）依次称取10～15g蔗糖、2～4g硝酸钠、1～3gMgSO₄·7H₂O、1～3gKCl、0.8～1.0gFeSO₄·7H₂O、10～20g琼脂加入到培养皿中，再加入800～1000mL去离子水，搅拌10～20min，制成培养基，培养菌种；（2）依次接种2～4株木霉、2～4株黑曲霉、2～4株芽孢杆菌到培养基上，在38～40℃，用摇床振荡培养12～14h，将培养液在7000～9000r/min下离心30～40min，弃去上清液，得到混合菌种；（3）移取10～20%上述混合菌种加入到发酵罐中，再依次加入5～10g葡萄糖、1～3g牛肉膏、200～300mLpH为6.8～7.0磷酸盐缓冲溶液，搅拌10～20min，在50～60℃下，用摇床振荡培养48～50h，将培养液在6000～8000r/min下离心20～30min，弃去下层杂质，得到混合酶液；（4）称取10～20g干姬松茸，用粉碎机进行粉碎，然后将姬松茸粉末加入到烧杯中，将烧杯置于水浴锅中，控制温度在45～55℃，向烧杯中加入200～300mL0.01mol/L氢氧化钠溶液，搅拌1～2h，再加入上述混合酶液，搅拌反应3～4h，将温度升高至90～100℃，搅拌10～20min，过滤，得到滤液，即姬松茸提取液；（5）向上述姬松茸提取液中依次加入1～3g聚丙烯酰胺、1～3g硫酸亚铁、1～3g活性炭，搅拌10～20min，过滤，得到滤液，将滤液置于二氧化碳超临界萃取仪中，控制萃取压力为20～30MPa，萃取温度为45～55℃，CO₂的流量为25～35kg/h，萃取20～30min，得到混合溶液；（6）将上述混合溶液加入到烧杯中，将烧杯置于冰水浴中，控制温度在0～5℃，向上述混合溶液中加入1～3g马来酸，搅拌反应1～2h，过滤，得到滤液，向滤液中加入2～4g四乙基氢氧化铵，搅拌反应1～2h，将0.1～0.3L液氮喷淋到烧杯上，使烧杯温度降至‑30～‑20℃，搅拌10～20min，过滤，得滤液，即姬松茸多糖溶液，将姬松茸多糖溶液进行减压蒸馏得到白色固体，将白色固体置于95～105℃烘箱内干燥2～3h，得到白色粉末，即一种高纯度姬松茸多糖。