[发明专利]可用于神经发育研究的胶质细胞原代培养模型的制备方法

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，具体是可用于神经发育研究的胶质细胞原代培养模型的制备方法。具体步骤包括第一步，取活生物，处死灭菌后，取出脑组织去除血污；第二步，将所述第一步处理的全脑移入培养皿中,剔除脑表面的脑膜和血管,冲洗后留大脑半球；第三步，将第二步处理的脑组织剪碎并研磨，加入5ml 0.05％胰酶，移入离心管，至于37℃细胞培养箱孵育消化30分钟；第四步，消化至无明显的脑组织团块，终止消化，制成单细胞悬液。第五步，离心，弃上层清液。第六步，制成细胞悬液，接种于培养板中,37℃培养。本发明的方法简单易于操作，胶质细胞培养成功率高。

主权项

可用于神经发育研究的胶质细胞原代培养模型的制备方法：第一步，取活生物，脱臼处死，用医用酒精浸泡灭菌后断头,迅速剪开颅骨，取出脑组织放到盛有含有15％青链霉素的冷PBS液的培养皿中反复冲洗以去除血污；第二步，将所述第一步处理的全脑移入另一盛有含有15％青链霉素的冷PBS液的培养皿中,用小镊子轻轻剔除脑表面的脑膜和血管,用PBS液冲洗后剪去脑干仅留大脑半球；第三步，将第二步处理的脑组织剪碎并研磨，加入5ml 0.05％胰酶，再移入50mL离心管，至于37度细胞培养箱孵育消化30分钟；第四步，每隔5min取出用吸管反复吹打消化至肉眼观察无明显的脑组织团块，加入10ml含有5％青链霉素的Advanced DMEM/F12终止消化，再次反复吹打制成单细胞悬液。第五步，离心，在1000r/min的离心机上离心5min后，弃上层清液。第六步，加完全培养液再次制成细胞悬液，1×106/孔接种于matrgal包被的6孔培养板中,置于5％CO2恒温细胞培养箱，37℃培养。