[发明专利]一种混菌发酵农作物秸秆生产柠檬酸的方法

摘要

本发明公开了一种混菌发酵农作物秸秆生产柠檬酸的方法，1）原材料处理：取当年的农作物秸秆，洗净，粉碎，过160‑180目水筛，在100W功率超声处理15min，制得农作物秸秆粉；取豆粕粉碎，过80目水筛，制得豆粕粉；2）发酵培养基的配制和灭菌：3）接种发酵，该发酵过程由A、B和C三阶段组成，接种发酵周期为112h；4）柠檬酸提取。本发明优点在于：以纤代粮，利用水稻秸秆发酵生产柠檬酸，节约粮食，降低成本，提高产品附加值；混菌同步糖化发酵技术，缩短发酵周期，减少生产设备投资，提高生产效率。

主权项

1.一种混菌发酵农作物秸秆生产柠檬酸的方法，其特征在于：按如下步骤进行：步骤1)原材料处理：取当年的农作物秸秆，洗净，粉碎，过160‑180目水筛，在100W功率超声处理15min，制得农作物秸秆粉；取豆粕粉碎，过80目水筛，制得豆粕粉；步骤2)发酵培养基的配制和灭菌：所述的发酵培养基各原料及用量为：固形物120g；(NH4)2SO4，4.8g；KH2PO4，3.6g；维生素b1，0.6g；Tween80，5.4g；微量元素混合液120ml；将发酵培养基加水至1000ml，pH调节至4.5，制得发酵培养液；向20L机械通风发酵罐投料12L发酵培养液，在121℃下灭菌25min，制得培养基料；所述的固形物是指农作物秸秆粉和豆粕粉按重量比4:1的混合物；所述的微量元素混合液g/L:氨基乙酸，0.5g/L；MgSO4·7H2O，3.0g/L；FeSO4·7H2O，0.1g/L；CoSO4，0.1g/L；CaCl2·2H2O，0.1g/L；ZnSO4·7H2O，0.19g/L；CuSO4·5H2O，0.01g/L；AlK(SO4)2·12H2O，0.01g/L；H3BO3，0.01g/L；Na2MoO4·2H2O，0.01g/L；MnSO4·H2O，0.01g/L；步骤3)接种发酵：该发酵过程由A、B和C三阶段组成，其中：A阶段： 当培养基料温度降到40℃时，加入菌龄16h的黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)一级菌种，其接种量为13％，开动搅拌，转速280r/min，通气量为0.8VVM，发酵温度设定32℃，调节发酵过程的pH为4.5，发酵12h；所述黄孢原毛平革菌菌株保藏编号为CICC40719；B阶段： A阶段发酵进行12h后，加入种龄12h的里氏木霉(Trichoderma reesei)一级菌种，其接种量为10％，把搅拌转速调为320r/min，通气量为0.8VVM，发酵温度调节为30℃，维持发酵过程的pH为4.5，发酵24小时；所述里氏木霉菌株保藏编号为CICC40359；C阶段： B阶段发酵进行24h后，加入种龄15h的黑曲霉(Aspergillus niger)一级菌种，其接种量为12％，加入2％的甲醇，搅拌转速调为240r/min，通气量0.9VVM，发酵温度设定为28℃，在该阶段发酵过程中需添加聚醚类的消泡剂；所述黑曲霉菌株保藏编号为CICC41275；所述消泡剂添加的方法：在培养基料中一次性添加质量分数为0.1‑0.3‰的消泡剂，然后在发酵周期再进行流加或滴加，使用的质量分数为0.3‑0.5‰；上述A、B和C三个阶段的发酵周期共为112h；步骤4)柠檬酸提取：采用色谱分离技术提取柠檬酸。