[发明专利]一种产红景天苷及其类似物的重组菌及构建方法及用途

摘要

本发明公开了一种产红景天苷及其类似物的重组菌及构建方法及用途，其构建方法为：合成酮基脱羧酶基因synkdc和糖基转移酶基因synyjic，连接到载体pRSFDuet‑1上，构建重组载体pSynkdc1‑yjic；将T7RNA聚合酶基因游离或整合到SyBE‑002447底盘菌株中，引入pSynkdc1‑yjic，得到SyBE‑218011和SyBE‑218013菌株；将synkdc和synyjic直接整合至SyBE‑002447染色体，同时敲除feaB和ushA，得到SyBE‑218015菌株；本发明的菌株，发酵生产红景天苷及其类似物，可解决红景天苷及其类似物的来源问题，降低成本。

主权项

一种产红景天苷及其类似物的重组菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：(1)人工全合成酮基脱羧酶基因synkdc，所述酮基脱羧酶基因synkdc如SEQ ID No.03所示；人工全合成糖基转移酶基因synyjic，所述糖基转移酶基因synyjic如SEQ ID No.04所示；(2)将synkdc基因通过酶切，连接到表达载体pRSFDuet‑1的第一个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体为pSynkdc1；(3)将synyjic基因连接到pSynkdc1的第二个启动子下游，筛选阳性克隆得到重组载体pSynkdc1‑yjic；(4)从大肠杆菌BL21(DE3)菌中克隆得到T7RNA聚合酶基因，连接到载体pYSC1上，筛选阳性克隆得到重组载体为pYBH1，所述pYSC1载体序列如SEQ ID No.05所示；(5)按下述三种方式之一种进行：方式一：①从大肠杆菌BL21(DE3)菌中克隆得到T7RNA聚合酶基因，通过λRed同源重组技术整合到SyBE‑002447底盘菌株染色体上得到SyBE‑002447(DE3)菌株；②将重组载体pSynkdc1‑yjic转化到大肠杆菌SyBE‑002447(DE3)中，得到SyBE‑218011菌株；方式二：①将重组载体pYBH1转化到大肠杆菌SyBE‑002447中，得到SyBE‑218012菌株；②将重组载体pSynkdc1‑yjic转化到大肠杆菌SyBE‑218012中，得到SyBE‑218013菌株；方式三：①将synkdc基因，通过λRed同源重组技术整合到大肠杆菌SyBE‑002447(DE3)中，同时敲除基因feaB，得到SyBE‑218014菌株；②将synyjic基因，通过λRed同源重组技术整合到大肠杆菌SyBE‑218014菌株中，同时敲除基因ushA，得到SyBE‑218015菌株。