[发明专利]一种恩诺沙星适配体/分子印迹杂化型上转换荧光探针的制备方法

摘要

一种恩诺沙星适配体/分子印迹杂化型上转换荧光探针的制备方法，以Y2O3、Yb2O3和Tm2O3为原料，制备上转换发光材料，进行硅烷化修饰后，用亲和素进一步修饰，制备亲和素修饰的上转换发光材料，将生物素修饰的恩诺沙星适配体连接于亲和素修饰的上转换发光材料表面，制备恩诺沙星适配体修饰的上转换发光材料；最后均匀分散于致孔剂中，加入功能单体，加入交联剂和引发剂，制得恩诺沙星适配体/分子印迹杂化型上转换荧光探针。优点是该探针具有分子印迹聚合物和适配体协同增效的双重识别保障，识别能力更加高效、精准；不但可以用于目标物恩诺沙星的特异性识别和富集，还可以用于定量测定。

主权项

一种恩诺沙星适配体/分子印迹杂化型上转换荧光探针的制备方法，其特征是：制备步骤如下：（1）将Y2O3、Yb2O3和Tm2O3硝酸化后，加入EDTA、CTAB的乙二醇溶液、HF和浓硝酸，进行水热反应，制得上转换发光材料NaYF4:Yb,Tm；（2）将步骤（1）制备的上转换发光材料0.05g‑0.2g分散于60mL‑100mL异丙醇中；依次加入20mL‑40mL的蒸馏水和2.5mL‑5mL质量浓度为25%的氨水，室温下搅拌15min‑30min；滴加40μL‑80μL的正硅酸乙酯(TEOS)，搅拌3h后；滴加200μL‑400μL的3‑氨丙基三乙氧基硅烷（APTES），室温下反应1h‑2h后停止搅拌，室温下陈化2h‑6h；离心分离，得到的固体物质经蒸馏水洗涤三次，60℃‑90℃烘干，得到硅烷化上转换发光材料；（3）将步骤（2）制得的硅烷化上转换发光材料10mg‑50mg，分散于5mL‑8mL浓度为10mmol/L磷酸缓冲盐溶液（PBS）中，加入1.25mL质量浓度为25%戊二醛溶液，在室温下振荡1h‑2h，离心分离，得到的固体物质用10mmol/L的PBS洗三次，重新分散于5mL‑8mL浓度为10mmol/L磷酸缓冲盐溶液（PBS）中，加入1mL浓度为0.1mg/mL‑0.2mg/mL的亲和素溶液中，在37℃振荡17h‑30h，离心分离，得到的固体物质用10mmol/L的PBS洗三次，得到亲和素修饰的上转换发光材料；（4）将步骤（3）制备的亲和素修饰的上转换发光材料10mg‑50mg均匀分散于10mmol/L的PBS中，加入200μL‑300μL浓度为1μmol/L的恩诺沙星适配体溶液，所述适配体核酸序列为5’‑CCC ATC AGG GGG CTA GGC TAA CAC GGT TCG GCT CTC TGA GCC CGG GTT ATT TCA GGG GGA ‑biotin‑3’，在37℃振荡17h‑30h，离心分离，得到的固体物质用10mmol/L的PBS洗三次，得到恩诺沙星适配体修饰的上转换发光材料；（5）将步骤（4）制备的恩诺沙星适配体修饰的上转换发光材料10mg‑50mg分散于10mmol/L的PBS中，加入1mL浓度为10μg/mL‑30μg/mL恩诺沙星溶液，在37℃振荡1h‑2h，离心分离，收集固体物质；（6）将步骤（5）得到的固体物质均匀分散于致孔剂中，加入功能单体，振荡15min‑30min，加入交联剂和引发剂，所述固体物质的质量与致孔剂的体积之比为10mg:5mL‑10mL，固体物质的质量与功能单体的摩尔比10mg:0.2mmol‑0.6mmol，固体物质质量与交联剂的摩尔比10mg:10mmol‑20mmol，固体物质与引发剂的质量比为10mg:0.01g‑0.08g；在60℃‑80℃水浴中振荡反应12h‑24h，振荡速度为150转/分‑300转/分，将产物置于甲醇中反复洗脱5次‑10次，再用解离缓冲液反复洗脱5次‑10次，制得恩诺沙星适配体/分子印迹杂化型上转换荧光探针。