[发明专利]一种测定乙醇脱氢酶活力的方法

摘要

本发明提供了一种测定乙醇脱氢酶酶活力的方法，包括一个配置缓冲体系的步骤，所述的缓冲体系为甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液；一个配置一定浓度的酰胺腺嘌呤二核苷酸溶液，并测定其荧光值，选取线性范围的步骤；一个制备酶液的步骤，将培养好的细胞离心收集菌体，加磷酸盐缓冲液制成菌悬液，经超声细胞粉碎仪破碎后离心收集上清液，上清液即为待测酶液；将酶液与反应体系分别在30‑37℃，温育3‑5min，混合后，在3‑5min内，以320nm‑380nm，激发波长和440nm‑480nm发射波长下，测定测反应体系中每分钟的荧光变化值，计算酶活力，酶活力单位（U/ml）=△_荧光值/分钟。本发明提高了酶活测定的灵敏度。

主权项

一种测定乙醇脱氢酶酶活力的方法，其特征在于包括以下步骤：1）一个配置缓冲体系的步骤，所述的缓冲体系为0.01 mol/L ‑0.2 mol/L的甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液，pH7.5‑9.0；2）一个配置一定浓度的酰胺腺嘌呤二核苷酸溶液，并测定其荧光值，选取线性范围的步骤，所述的酰胺腺嘌呤二核苷酸溶液的浓度为1×10^‑4‑8×10^‑5 mol/L，线性范围为1×10^‑4—2×10^‑5mol/L，激发波长320nm‑380nm，发射波长440nm‑480nm；3）一个制备酶液的步骤，将培养好的细胞离心收集菌体，加磷酸盐缓冲液制成菌悬液，经超声细胞粉碎仪破碎后离心收集上清液，上清液即为待测酶液；4）将酶液与反应体系分别在30‑37℃，温育3‑5min，反应体系包括甘氨酸‑氢氧化钠缓冲液、乙醇、酰胺腺嘌呤二核苷酸和酶液，混合后，在3‑5min内，以320nm‑380nm，激发波长和440nm‑480nm发射波长下，测定测反应体系中每分钟的荧光变化值，计算酶活力，酶活力单位（U/ml）=△_荧光值/分钟。