[发明专利]一种植物基因组DNA提取方法有效
申请号: | 201610388823.5 | 申请日: | 2016-06-03 |
公开(公告)号: | CN106047860B | 公开(公告)日: | 2019-01-01 |
发明(设计)人: | 魏云洁;张亚玉;张舒娜;关一鸣;孙海;王秋霞 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院特产研究所 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人: | 李进 |
地址: | 130112 吉林省长*** | 国省代码: | 吉林;22 |
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摘要: | 本发明涉及分子生物学实验技术领域,具体而言,涉及一种植物基因组DNA提取方法,包括:破碎植物样本得到植物粉末;所述植物粉末依次经分离液、裂解液和活性剂溶液、CTAB提取缓冲液、氯仿‑异戊醇溶液处理后,得到含有DNA的提取液,除去该提取液中的杂质既得基因组DNA。所述的DNA提取方法可有效地去除纤维素、多糖或蜡质、酚类等杂质,且省时、操作容易、成本低,尤其适合于龙胆科植物的干枯革质叶片的DNA提取。 | ||
搜索关键词: | 一种 植物 基因组 dna 提取 方法 | ||
【主权项】:
1.一种植物基因组DNA提取方法,其特征在于,包括以下步骤:1)、破碎植物样本得到植物粉末;所述植物样本为干枯革质叶片;2)、取所述植物粉末加入到分离液中,混匀后离心,弃上清得到第一沉淀;3)、向所述第一沉淀中加入裂解液并混匀后加入所述活性剂溶液得到混合液1,将混合液1静置8min~15min;4)、加入CTAB提取缓冲液得到混合液2,将所述混合液2于63℃~67℃孵育50min~70min;5)、加入与所述混合液2等量的氯仿‑异戊醇溶液并搅拌、离心,将离心后所得上层水相称为提取液1,除去所述提取液1中的杂质,得到基因组DNA;所述分离液含有浓度为140g/L~160g/L的PEG4000、0.3M~0.4M山梨醇、浓度为2g/L~8g/L的亚精胺、浓度为2g/L~8g/L的精胺、体积百分数为0.4%~0.6%的β‑巯基乙醇,所述分离液的溶剂为0.09M~0.11M pH=7.8~8.2的Tris‑HCl溶液;所述裂解液含有0.3M~0.4M山梨醇、浓度为2g/L~8g/L的亚精胺、浓度为2g/L~8g/L的精胺、体积百分数为0.5%的β‑巯基乙醇,所述裂解液的溶剂为0.09M~0.11M pH=7.8~8.2的Tris‑HCl溶液;所述活性剂溶液为质量百分数为5%~10%的L‑肌氨酸。
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