[发明专利]突变基因的定量检测方法

摘要

本发明公开了一种突变基因的定量检测方法，步骤包括：1)提取样本DNA；2)单链合成反应；3)微球捕获纯化；4)微球上的3’端保护性外切纯化反应；5)以步骤4)的产物为模板进行微球上的单链合成反应，分离去除微球；6)3’端保护性外切纯化反应；7)双端接头桥媒连接反应，并纯化；8)以前次纯化产物为模板，反复进行单链合成反应和3’端保护性外切纯化反应；9)定量，测序，判断突变基因。该方法以靶标基因片段为模板进行反复多循环单链合成反应，将原始模板上系列位点的碱基转化为互补序列，使靶标基因序列最大保真地转化合成，经多级单链合成后，获得测序所需的足量完整待测序列，如此提高了低比例突变基因的检测灵敏度和保真度。

主权项

突变基因的定量检测方法，其特征在于，步骤包括：1)提取样本DNA；2)以步骤1)提取的DNA为模板进行单链合成反应；3)用微球捕获纯化步骤2)的产物；4)在微球上对步骤3)的产物进行3’端保护性外切纯化反应；5)以步骤4)的产物为模板，在微球上进行单链合成反应，然后分离去除微球；6)对步骤5)的产物进行3’端保护性外切纯化反应；7)对步骤6)的产物进行双端接头桥媒连接反应；8)纯化步骤7)的产物；9)以纯化后的产物为模板，进行单链合成反应和3’端保护性外切纯化反应；10)以步骤9)的产物为模板，进行单链合成反应和3’端保护性外切纯化反应；11)参照步骤9)～10)，以前次纯化产物为模板进行单链合成反应和3’端保护性外切纯化反应，多次重复，直到产物的量达到二代测序所需的量；12)定量后进行二代测序，根据测序结果判断突变基因。