[发明专利]清热解毒类药品抗菌生物活性测定多参数评价方法

摘要

本发明涉及中医药技术领域，具体为一种清热解毒类药品抗菌生物活性测定多参数评价方法，包括（1）、菌液制备，（2）、药液制备，（3）、正式试验，（4）、结果计算与多参数统计：定义：R≥0.8为极相关，计分为2；0.5<R<0.8为相关，计分为1；R ≤0.5为可疑，计分为0；IC50≥0.1为可疑，计分为0；0.01< IC50<0.1为抑制，计分为1；IC50≤0.01为强抑制，计分为2；IC95≥5为可疑，计分为0；1< IC95<5为抑制，计分为2；IC95≤1为强抑制，计分为3；统计每批药物对各菌的此三项计分和，将每个企业各批次计分和平均作为此企业样品抑菌指数。

主权项

一种清热解毒类药品抗菌生物活性测定多参数评价方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）、菌液制备：用选择性琼脂平板分离所试菌，取纯菌接种MH肉汤，化脓性链球菌接种脑浸出物培养基，37℃培养24小时，该菌液作为原液，再用稀释液稀释至所需浓度备用，计数大约10⁷~10⁸个/mL；（2）、药液制备：将供试品用生理盐水配制成0.25g/mL混悬液，对照组按照原处方去除主药后其余药物的用量及相同浓度药物，配制成混悬液，其中含芒硝0.962g/100mL，石膏1.923g/100mL，滑石粉5.769g/100mL，震荡混匀3min，3000rpm，10min后，取上清用0.45µm膜过滤，无菌分装备用；实验时，用MH肉汤做2倍稀释，最终菌液中药物浓度为0.125g/mL~0.004g/mL；同时设空白对照，阳性对照；（3）、正式试验：各管加入培养液稀释的药液0.5mL，各管依次定量加入用培养液稀释好的试验菌液（10⁵/mL~10⁶/mL），0.5mL，混匀，封口，37℃培养24小时，观察各管试验情况，并分别取出培养物定量（200µL）点种无菌平板内，加0.5% MTT 50µL，37℃培养4小时，加DMSO 100µL吹打提取MTT，酶标492nm测定结果；（4）、结果计算与多参数统计：根据酶标仪测定的MTT吸光度值，设同板菌液对照孔OD平均值为对照，其抑制率0%，计算不同浓度药物抑制率，抑制率=（对照OD‑药物组OD）/对照OD，用IC50计算软件计算如下指标：IC50，IC95，量效关系R值为多参数评价指标；定义：R≥0.8为极相关，计分为2；0.5<R<0.8为相关，计分为1；R ≤0.5为可疑，计分为0；IC50≥0.1为可疑，计分为0；0.01< IC50<0.1为抑制，计分为1；IC50≤0.01为强抑制，计分为2；IC95≥5为可疑，计分为0；1< IC95<5为抑制，计分为2；IC95≤1为强抑制，计分为3；统计每批药物对各菌的此三项计分和，将每个企业各批次计分和平均作为此企业样品抑菌指数。