[发明专利]一种羧甲基化五味子多糖及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种羧甲基化五味子多糖及其制备方法和应用，属于多糖改性技术领域。该羧甲基化五味子粗多糖的得率为88.37±1.65%，羧甲基化取代度为0.724±0.022，溶解度为0.5±0.04 mg/mL，是原五味子多糖溶解度的5倍。羧甲基化五味子多糖的溶解度为12.5±0.26 mg/mL，分子量为3.4×10⁶ Da，单糖组成为：甘露糖、葡萄糖和半乳糖，其摩尔比为1:44.84:3.71。本发明反应温度在40‑80°C、反应时间在1‑8 h，氯乙酸终浓度在0.005‑0.08 g/mL的条件下，所得羧甲基化五味子多糖的得率和取代度均较高，水溶性好，且对持久性有机污染物PCB126致小鼠免疫抑制有显著的改善作用，可提高小鼠脾脏和胸腺指数，增加血清中TNF‑α、IFN‑γ和IL‑2的水平，可作为免疫增强剂，用作功能食品和食品添加剂。

主权项

1.一种羧甲基化五味子多糖，其特征在于：所述羧甲基化五味子多糖的分子量为1.698×10⁴ Da，所述羧甲基化五味子多糖的单糖组成为：甘露糖、葡萄糖和半乳糖，摩尔比为1:44.84:3.71，所述羧甲基化五味子多糖的溶解度为12.24‑12.76 mg/mL，所述羧甲基化五味子多糖在水溶液中呈聚集状形成分子链，所述分子链的厚度为0.1‑1 nm；按照下述步骤进行：（1）五味子粗多糖的制备：将新鲜五味子于55‑65℃烘箱内干燥12‑24h后进行粉碎，采用石油醚对干燥后的五味子进行回流脱脂2‑3次，然后将脱脂后的五味子药渣以料液比1:10‑1:15加入蒸馏水进行水提，取2‑3次得到五味子多糖提取液，五味子多糖提取液经减压浓缩，采用80%的乙醇醇沉3‑4次，得到的醇沉物经离心后，复溶、挥醇，经截留分子量为3000 Da的透析袋透析12‑36h，真空干燥2‑3h得到五味子粗多糖；（2）五味子多糖的羧甲基化：将五味子粗多糖溶于异丙醇溶液中，机械搅拌使其充分溶解，五味子粗多糖和异丙醇料液比为1:30 ‑ 1:40（g/mL），溶解温度为20‑25℃，搅拌时间为15‑20 min，搅拌速度为60‑240 r/min，向溶解后的五味子多糖溶液中加入质量分数为15‑20%的NaOH溶液进行碱化，NaOH溶液的加入量为异丙醇体积的20‑30%，碱化温度为20‑25℃，碱化时间为1‑2 h，然后在搅拌状态下继续向碱化后的五味子粗多糖反应液中加入氯乙酸进行羧甲基化，氯乙酸加入量为0.005‑0.08 g/mL，水浴温度为40‑80℃，羧甲基化反应时间为1‑8 h，待反应液冷却后调节反应液pH至中性，采用乙醇醇沉，离心后得到醇沉产物，将醇沉产物采用少量蒸馏水复溶后进行透析，透析结束后进行真空干燥得到羧甲基化五味子粗多糖；（3）纯化：将步骤（2）得到的羧甲基化五味子粗多糖溶解于0.05‑0.1mol/L 的NaCl溶液中，然后缓慢滴加至DEAE‑52层析柱中，并采用0.05‑0.2 mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，绘制洗脱曲线，根据洗脱曲线分别收取合并洗脱液，得到羧甲基化五味子多糖不同组分，选取0.05mol/L NaCl的洗脱组分合并，经截留分子量为3000 Da的透析袋透析、真空干燥后，得到羧甲基化五味子多糖。