[发明专利]一种同时检测N-MID和β-CTX的双标记时间分辨荧光免疫分析方法

摘要

本发明公开了一种同时检测N‑MID和β‑CTX的双标记时间分辨荧光免疫分析方法。本发明首次利用TRFIA方法同时检测骨钙素N端中分子片段N‑MID和β胶原降解产物β‑CTX。β‑CTX可以判断骨丢失率和骨破坏水平，是判断骨质疏松症有用的筛选参数；联合检测N‑MID，可以提高诊断的敏感性和准确性。本发明方法较酶联免疫法更敏感，更特异，同时针对两个标记物进行检测，可以更好地检测骨质疏松。本发明的试剂盒可以同时检测N‑MID和β‑CTX，敏感性高、快速、简便、易于临床推广。

主权项

一种同时检测N‑MID和β‑CTX的双标记时间分辨荧光免疫分析方法，其特征在于，包括下列步骤：1）固相抗原的制备：分别将N‑MID和β‑CTX的偶联抗原用包被缓冲液稀释至1～5μg/ml，包被酶联板，并用封闭液封闭；2）镧系元素离子标记抗体的制备：分别采用不同的镧系元素离子标记N‑MID或β‑CTX抗体，分离纯化；3）测定方法：在步骤1）制备的含有两种偶联抗原的酶联板上，每孔依次加入N‑MID和β‑CTX的标准品或者待测样品，补加分析缓冲液，室温震荡反应，洗涤液洗涤后，加入以分析缓冲液稀释的步骤2）制备的不同的镧系元素离子标记的N‑MID或β‑CTX抗体，室温震荡反应后，洗涤液洗涤，最后加入增强液进行荧光检测。