[发明专利]自诱导强化型海藻糖合酶合成工程菌的制备方法与应用

摘要

本发明涉及自诱导强化型海藻糖合酶合成工程菌的制备方法与应用。一种重组载体，在穿梭质粒pMA5‑HpaII的两个酶切位点EcoRI和KpnI之间插入ComQ‑ComX基因，在两个酶切位点BamHI和MluI之间插入通过重叠PCR将Psrf启动子基因、Tat型信号肽PhoD基因和海藻糖合成酶基因TreS连接起来的连接片段。本发明采用枯草芽孢杆菌表面活性素启动子Psrf和海藻糖合成酶融合后进行诱导表达的效果显著优于其它诱导型表达的效果；该工程菌无需添加任何的诱导剂进行诱导海藻糖合成酶的分泌表达，这符合了食品安全级别酶制剂的制备，海藻糖合成酶在食品医疗行业中能够广泛应用。

主权项

1.一种重组载体，其特征在于，在穿梭质粒pMA5‑HpaII的两个酶切位点EcoRI和KpnI之间插入ComQ‑ComX基因，在两个酶切位点BamHI和MluI之间插入通过重叠PCR将Psrf启动子基因、Tat型信号肽PhoD基因和海藻糖合成酶基因TreS连接起来的连接片段；所述的ComQ‑ComX基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；自诱导型启动子Psrf核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；Tat型信号肽PhoD核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；海藻糖合成酶基因TreS核苷酸序列如SEQ ID NO.4。