[发明专利]一种环五肽的合成方法

摘要

本发明公开一种环五肽的合成方法。该方法采用“固液结合”策略及用合适的缩合试剂进行缩合反应，通过适当的工艺分别制备线性五肽，且关环位点选在N‑甲基亮氨酸与亮氨酸之间，有效提高制备线性肽时的效率。用合适的缩合试剂进行缩合反应，能有效地减少在形成酰胺键时的消旋化，从而有效提高了目标产物的纯度，纯度可达99％以上，能够充分满足生物活性试验和临床应用的需要，具有较高的医学价值。采用环合试剂PyBOP进行关环反应，可有效提高环合收率，其环合收率达84.2％。该方法不需进行繁杂的柱层析纯化，经由简单的洗涤即可将多余的氨基酸洗去，合成工艺简单，原料成本低，反应条件温和，纯度高，易于产业化，具有广阔的市场前景。

主权项

1.一种环五肽的合成方法，其特征在于具体包括以下步骤：(1)将芴甲氧羰酰基亮氨酸进行N‑甲基化反应，得到芴甲氧羰酰基N‑甲基‑亮氨酸；(2)将芴甲氧羰酰基亮氨酸连接到2‑氯三苯甲基氯树脂，得到保护氨基酸和树脂的复合物Fmoc‑Leu‑Resin(R‑1A)；(3)将步骤(2)得到的Fmoc‑Leu‑Resin(R‑1A)进行脱除保护基芴甲氧羰酰基处理后，与芴甲氧羰酰基亮氨酸在缩合试剂存在的条件下与其进行缩合反应，得到保护二肽和树脂的复合物Fmoc‑Leu‑Leu‑Resin(R‑2A)；(4)将步骤(3)得到的Fmoc‑Leu‑Leu‑Resin(R‑2A)进行脱除保护基芴甲氧羰酰基处理后，与步骤(1)得到的芴甲氧羰酰基N‑甲基‑亮氨酸在缩合试剂存在下进行缩合反应得到保护三肽和树脂的复合物Fmoc‑N‑Me‑Leu‑Leu‑Leu‑Resin(R‑3A)；(5)将步骤(4)得到的保护三肽和树脂的复合物Fmoc‑N‑Me‑Leu‑Leu‑Leu‑Resin(R‑3A)进行脱除保护基芴甲氧羰酰基处理后，与芴甲氧羰酰基亮氨酸在缩合试剂存在的条件下与其进行缩合反应得到保护四肽和树脂的复合物Fmoc‑Leu‑N‑Me‑Leu‑Leu‑Leu‑Resin(R‑4A)；(6)将步骤(5)得到的保护四肽和树脂的复合物Fmoc‑Leu‑N‑Me‑Leu‑Leu‑Leu‑Resin(R‑4A)进行脱除保护基芴甲氧羰酰基处理后，与步骤(1)得到的芴甲氧羰酰基N‑甲基‑亮氨酸在缩合试剂存在下进行缩合反应得到保护五肽和树脂的复合物Fmoc‑N‑Me‑Leu‑Leu‑N‑Me‑Leu‑Leu‑Leu‑Resin(R‑5A)，对其进行脱除保护基芴甲氧羰酰基处理后进行切肽反应，得到线性五肽后对线性五肽进行关环反应，得到环五肽；所述的环五肽，其化学名称为：环(亮氨酰‑亮氨酰‑N‑甲基‑亮氨酰‑亮氨酰‑N‑甲基‑亮氨酰)；英文缩写表达式为：cyclo‑(Leu‑Leu‑N‑Me‑Leu‑Leu‑N‑Me‑Leu)；分子式为C₃₂H₅₉N₅O₅；结构式如下所示：步骤(3)、(4)、(5)、(6)中所述的缩合试剂为1‑羟基‑7‑偶氮苯并三氮唑和1,3‑二异丙基碳二亚胺；所述的1‑羟基‑7‑偶氮苯并三氮唑和1,3‑二异丙基碳二亚胺的摩尔比为1：1；步骤(6)中所述的关环反应是指用PyBOP作为环合试剂，线性五肽首尾环合得到环五肽，其具体操作步骤为：将线性五肽溶于二氯甲烷中，氮气保护下，再向其中加入环合试剂PyBOP，DIEA调节pH至7～8，室温下搅拌反应，反应24～48小时，减压蒸除溶剂，用反相HPLC分离得到目标产物。