[发明专利]一种检测白细胞中结核分枝杆菌的免疫荧光染色方法及试剂盒

摘要

本发明建立了一种通过荧光染色快速检测血液（血浆和血细胞）中结核分枝杆菌的方法与试剂盒，用结核分枝杆菌RD‑1区ESAT‑6和CFP‑10抗原的单克隆抗体，特异性地检测血液中结核分枝杆菌ESAT‑6和CFP‑10抗原，用于结核性疾病的病原学检测和早期、快速临床诊断。本发明将血液分为血浆和血细胞两部分，用基于膜的微流体装置分离富集血浆中的结核分枝杆菌，同时将血细胞（白细胞）涂布于玻片上，用ESAT‑6和CFP‑10抗原的单克隆抗体，以荧光染色直接法和间接法检测血浆和白细胞内的结核分枝杆菌。本方法操作简单，灵敏度高，特异性强，是一种明确的结核病原学诊断方法，已研制成检测血液中结核分枝杆菌的试剂盒；并且既能检测致病性结核分枝杆菌感染，理论上又能区分因接种卡介苗血液中出现的非致病性结核分枝杆菌。

主权项

一种检测白细胞中结核分枝杆菌的方法，包括步骤：a. 通过离心或者自然下沉法从血液中收集血细胞；b. 加入红细胞裂解液使红细胞裂解；c. 离心收集白细胞；d. 可选地，洗涤白细胞；e. 重悬白细胞；f. 制成白细胞涂片；g. 使用固定液固定白细胞；h. 使用通透液透化白细胞；i. 使用封闭液封闭；g. 使用抗结核分枝杆菌ESAT‑6或者CFP‑10的多克隆或者单克隆抗体进行直接或者间接荧光染色；k. 下荧光显微镜下观察是否白细胞涂片中是否存在荧光，如果存在荧光则说明白细胞中存在结核分枝杆菌，如果不存在荧光则说明白细胞中不存在结核分枝杆菌。