[发明专利]一种含有碳氮键的His-Vx3-eGFP蛋白-纳米铝共价偶联泛素化蛋白及其提取方法和应用有效
| 申请号： | 201610180003.7 | 申请日： | 2016-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN105777873B | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 王立新;沈艳飞;赵金金 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C07K14/00 | 分类号： | C07K14/00;C07K1/107;C07K1/14;A61K39/00;A61K39/39 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 郑立发 |
| 地址： | 211189 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种含有碳氮键His‑Vx3‑eGFP蛋白‑纳米铝共价偶联泛素化蛋白及其提取方法和应用，所述泛素化蛋白是由His‑Vx3‑eGFP蛋白和经过修饰后的纳米铝，通过碳氮双键形成偶联物，然后偶联物再与经过处理后的肿瘤细胞裂解液孵育，即得所述泛素化蛋白。相对于现有技术，本发明所得α‑Al2O3‑His‑Vx3‑eGFP性质稳定，能够大大提高泛素化蛋白的募集效果，简化了实验操作。此外，还克服了原有泛素化蛋白疫苗使用时添加佐剂的缺陷。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 含有 碳氮键 his vx3 egfp 蛋白 纳米 共价 偶联泛素化 及其 提取 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种含有碳氮键的His‑Vx3‑eGFP蛋白‑纳米铝共价偶联泛素化蛋白，其特征在于，所述泛素化蛋白是由His‑Vx3‑eGFP蛋白和经过修饰后的纳米铝，通过碳氮双键形成偶联物，然后偶联物再与经过处理后的肿瘤细胞裂解液孵育，即得所述泛素化蛋白；泛素化蛋白的提取方法，包括以下步骤：(1)利用三乙氧基硅烷，对纳米铝颗粒进行修饰；修饰方法为：纳米铝与过量的三乙氧基硅烷室温下搅拌反应，使三乙氧基硅烷与纳米铝上的羟基反应；(2)将修饰后的纳米铝与戊二醛反应，使醛基连接至纳米铝，然后加入His‑Vx3‑eGFP蛋白，通过生成碳氮双键形成His‑Vx3‑eGFP蛋白‑纳米铝共价偶联物；(3)培养肿瘤细胞，抑制泛素化蛋白的降解，经细胞裂解液处理，离心得上清液；抑制泛素化蛋白降解的方法为：培养的肿瘤细胞生长至80％，加入万珂和氯化铵，加入量分别为160nmol/L‑240nmol/L和25mmol/L‑35mmol/L，干预肿瘤细胞14‑18小时，抑制泛素化蛋白的降解；(4)将步骤(2)所得共价偶联物和步骤(3)所得上清液共孵育，即得所述泛素化蛋白α‑Al2O3‑His‑Vx3‑eGFP‑Ub。
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