[发明专利]具有细胞示踪功能的液体荧光微球的制备及应用方法

摘要

本发明提供的是一种具有细胞示踪功能的液体荧光微球的制备及应用方法。将纳米晶体NaYF₄:Yb³⁺,Er³⁺加入到有机溶剂环己烷中，其在环己烷中可以均匀分散。混合溶液中加入有机溶剂二辛脂，环己烷挥发后纳米晶体均匀分散于二辛脂中。借助毛细注射管将纳米晶体均匀分散的二辛脂溶液注入体外培养细胞，其在细胞内液中形成液体微球。使用细胞注射器将含有液体微球的细胞注入生物体内。液体微球中均匀分散的纳米晶体在980nm激光照激发下发出绿色荧光，具有细胞示踪功能。本发明提出了一种全新的体内细胞示踪方式，对于研究细胞在体内的迁移、增殖、代谢和分布规律等具有重要的临床意义。

主权项

1.一种具有细胞示踪功能的液体荧光微球的制备方法，其特征是：(1)将纳米晶体NaYF4:Yb3+,Er3+与环己烷混合，超声处理一小时得到混合溶液，纳米晶体NaYF4:Yb3+,Er3+与环己烷的混合比例为1μg纳米晶体NaYF4:Yb3+,Er3+加入到1mL环己烷中；(2)向所述混合溶液中加入二辛脂，超声处理一小时，得到纳米晶体均匀分散的二辛脂溶液，加入二辛脂的体积与环己烷的体积相等；(3)用毛细注射管抽取所述纳米晶体均匀分散的二辛脂溶液，注入体外培养的细胞中，在细胞内液中形成具有细胞示踪功能的液体荧光微球，所述毛细注射管是使用拉锥机将外径为125μm、内径为100μm的毛细石英管拉成内径为10μm的锥形微针；所述体外培养的细胞的培养方法为：(1)将1mL细胞冻存管从液氮中取出，立即投入37℃水浴锅中，2分钟后，待全部融化形成细胞悬液取出冻存管，移至超净工作台；(2)将细胞悬液吸到装10mL含重量比10％的胎牛血清培养液的离心管中，1000转/分离心5分钟；(3)去掉上清液，加1mL培养液把细胞悬浮起来，吸到装有10mL培养液的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。