[发明专利]一种富油新绿藻的遗传转化方法有效
| 申请号： | 201610135114.6 | 申请日： | 2016-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN105624185B | 公开（公告）日： | 2020-03-17 |
| 发明（设计）人： | 李雁群;张茜;朱宏波;谭瑜;C·Q·兰;卢虹玉;吉宏武;洪鹏志;胡雪琼;苏伟明 | 申请（专利权）人： | 广东海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 张月光;林伟斌 |
| 地址： | 524088 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种富油新绿藻的遗传转化方法，包括如下步骤：S1.携带双元表达载体农杆菌准备；S2.富油新绿藻细胞的准备；S3.共培养：将S1保存的农杆菌转移到液体培养基中培养到对数生长期，将得到的农杆菌细胞与S2得到的藻细胞混合培养；S4.转化子筛选：收集S3共培养后的细胞，再用液体培养基将藻细胞制成细胞悬液，涂布于含潮霉素的筛选平板上，连续光照培养直到长出藻落，计数平板上长出的藻落数，挑取长出的藻落转移保存、检测。本发明对一种新的宿主富油新绿藻实现了转基因操作，对各步骤参数进行了优化限定，为富油新绿藻的基因工程操作开辟了道路。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 富油新 绿藻 遗传 转化 方法 | ||
【主权项】：
一种富油新绿藻的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1. 携带双元表达载体农杆菌准备：将重组的pCAMBIA1301质粒转入感受态农杆菌中，再将转化后的农杆菌涂布于培养平板上培养，挑选出成功转入了质粒的农杆菌，转移到固体培养基保存；S2. 富油新绿藻（Neochloris oleoabundans）细胞的准备：培养富油新绿藻细胞到对数生长期，离心，得到藻细胞，用于共培养；S3. 共培养：将S1保存的农杆菌转移到液体培养基中培养到对数生长期，将得到的农杆菌细胞与S2得到的藻细胞混合培养；S4. 转化子筛选：收集S3共培养后的细胞，再用液体培养基将藻细胞制成细胞悬液，涂布于含潮霉素的筛选平板上，连续光照培养直到长出藻落，计数平板上长出的藻落数，挑取长出的藻落转移保存、检测；其中，S1所述重组的pCAMBIA1301质粒包含Hsp70A‑RBCS2启动子+GUS基因+RBCS2终止子的表达盒和CaMV35s启动子+ hygromycin基因+ CaMV35s poly A终止子的表达盒。
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