[发明专利]一种富油新绿藻的遗传转化方法

权利要求书

1.一种富油新绿藻的遗传转化方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.携带双元表达载体农杆菌准备：将重组的pCAMBIA1301质粒转入感受态农杆菌中，再将转化后的农杆菌涂布于培养平板上培养，挑选出成功转入了质粒的农杆菌，转移到固体培养基保存；

S2.富油新绿藻(Neochloris oleoabundans)细胞的准备：培养富油新绿藻细胞到对数生长期，离心，得到藻细胞，用于共培养；

S3.共培养：将S1保存的农杆菌转移到液体培养基中培养到对数生长期，将得到的农杆菌细胞与S2得到的藻细胞混合培养；

S4.转化子筛选：收集S3共培养后的细胞，再用液体培养基将藻细胞制成细胞悬液，涂布于含潮霉素的筛选平板上，连续光照培养直到长出藻落，计数平板上长出的藻落数，挑取长出的藻落转移保存、检测；

其中，S1所述重组的pCAMBIA1301质粒包含Hsp70A-RBCS2启动子+GUS基因+RBCS2终止子的表达盒和CaMV35s启动子+hygromycin基因+CaMV35s poly A终止子的表达盒；S2所述培养富油新绿藻所用的培养基为改良SE培养基，培养基配方为：NaNO₃ 0.85g/L,K₂HPO₄·3H₂O 0.15g/L,MgSO₄·7H₂O 0.15g/L,CaCl₂·2H₂O 0.05g/L,KH₂PO₄ 0.35g/L,NaCl 0.05g/L,FeCl₃·6H₂O 0.01g/L,H₃BO₃ 2.86mg/L,MnCl₂·4H₂O 1.81μg/L,(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O 39μg/L，ZnSO₄·7H₂O 220μg/L，CuSO₄·5H₂O 79μg/L；

S3所述的混合培养采用液体培养，培养基为改良SE培养基再添加0.5～2.0g/L NaHCO₃作为碳源，培养条件为在500～2000Lux的光照强度连续光照，25～30℃培养24-72小时；

S4所述的筛选平板为改良SE培养基再添加10μg/mL潮霉素、0.5～2.0g/L NaHCO₃和1.5-2.0％琼脂制作的培养平板。