[发明专利]酶引发的自由基聚合反应及检测应用

摘要

本发明提供一种新型的信号放大体系和方法，可以用于化学生物医学检测。本发明利用过氧化物酶和G四链体过氧化物酶构建自由基引发体系，用于引发自由基聚合，并利用聚集诱导发光实现荧光信号放大。本体系可以实现对核酸的检测和适配体靶标的检测。本方法可以在荧光定量PCR仪上使用，通过荧光信号获得检测物浓度。相对于PCR、滚环扩增等核酸扩增的方法，本方法不涉及核酸扩增的过程，因而不需要DNA聚合酶等价格昂贵的试剂，也不存在核酸的非特异性扩增的问题。本方法还可以与酶联免疫法、ELISA和核酸扩增等方法联用，实现多轮信号放大，并用于抗体抗原的检测。

主权项

一种信号放大的检测体系，组成包括：荧光分子、单体分子、过氧化物酶；所使用的荧光分子种类不限于一种，荧光分子的特征在于：分子中含有苯乙烯单元，还含有具有结合功能的基团，二者通过共价键连接或者有机单元桥连；所使用的单体分子种类不限于一种，单体分子的特征在于：分子中含有反应官能团，反应官能团选自：烯、炔、呋喃、苯胺、苯酚、巯基、环烷、含杂原子的环烷等；所使用的单体中，其中至少有一种符合以下特征：除含有上述反应官能团外，还含有具有结合功能的基团，二者通过共价键连接或者有机单元桥连；荧光分子和单体分子上的具有结合功能的基团各自独立，选自：羧基、磺酸基、磷酸基、磷酸酯基、连有芳香环的羟基、羟基、硼酸基、芳香环取代的硼酸基、氨基、胺基、含取代基的胺基、亚胺基、肟基、胍基、含取代基的胍基、膦基、含氮杂环的季铵盐、含金属的配合物基、含芳香环的基团、容易形成氢键的基团、巯基等；荧光分子和单体分子的结合基团可以通过疏水作用、π‑π作用、静电作用、配位作用、氢键作用、可逆共价键结合起来；过氧化物酶选自蛋白质构成的过氧化物酶或核酸构成的过氧化物酶；该体系特征在于：在没有酶底物的时候，荧光分子分散游离，荧光很弱；当有底物时，过氧化物酶可以催化底物形成自由基，进而引发单体分子的自由基聚合反应，进而使荧光分子聚集在聚合产物上，并导致荧光分子的荧光增强。