[发明专利]酶引发的自由基聚合反应及检测应用

权利要求书

1.一种信号放大的检测体系，组成包括：荧光分子、单体分子、过氧化物酶；

所使用的荧光分子种类不限于一种，荧光分子的特征在于：分子中含有苯乙烯单元，还含有具有结合功能的基团，二者通过共价键连接或者有机单元桥连；

所使用的单体分子种类不限于一种，单体分子的特征在于：分子中含有反应官能团，反应官能团选自：烯、炔、呋喃、苯胺、苯酚、巯基、环烷、含杂原子的环烷；所使用的单体中，其中至少有一种符合以下特征：除含有上述反应官能团外，还含有具有结合功能的基团，二者通过共价键连接或者有机单元桥连；

荧光分子和单体分子上的具有结合功能的基团各自独立，选自：羧基、磺酸基、磷酸基、磷酸酯基、连有芳香环的羟基、羟基、硼酸基、芳香环取代的硼酸基、氨基、胺基、含取代基的胺基、亚胺基、肟基、胍基、含取代基的胍基、膦基、含氮杂环的季铵盐、含金属的配合物基、含芳香环的基团、容易形成氢键的基团、巯基；荧光分子和单体分子的结合基团可以通过疏水作用、π-π作用、静电作用、配位作用、氢键作用、可逆共价键结合起来；

过氧化物酶选自蛋白质构成的过氧化物酶或核酸构成的过氧化物酶；

该体系特征在于：在没有酶底物的时候，荧光分子分散游离，荧光很弱；当有底物时，过氧化物酶可以催化底物形成自由基，进而引发单体分子的自由基聚合反应，进而使荧光分子聚集在聚合产物上，并导致荧光分子的荧光增强。

2.如权利要求1所述的检测体系，单体分子的优选结构有：

3.如权利要求1所述的检测体系，所使用的荧光分子的特征在于：分子中含有以苯乙烯为子单元的荧光基团，还含有具有结合功能的基团，二者通过共价键连接或者有机单元桥连；

其中，荧光基团优选结构如下：

4.如权利要求3所述的检测体系，所使用的荧光分子的特征在于：分子中含有以苯乙烯为子单元的荧光基团，还含有具有结合功能的基团，二者通过共价键连接或者有机单元桥连；

荧光分子的优选结构有：

5.一种信号放大的检测体系，其组成除了包括如权利要求1所述的荧光分子、单体分子、过氧化物酶之外，还包括以下一种或几种物质：链转移剂、稳定自由基、稳定自由基前体、荧光猝灭剂；

链转移剂的特征在于能够与自由基发生自由基转移反应，抑制活性自由基的链终止反应，增加单体反应的转化率；这类物质选自巯基化合物、β-二酮；

稳定自由基或稳定自由基前体，特征在于：这些物质或者这些物质形成的自由基可以与链增长的自由基发生可逆的链终止或加成消除反应，用于抑制链转移和链终止反应，实现活性自由基聚合，提高聚合反应的聚合度；这类物质选自胺氧自由基、烷氧胺、黄原酸酯、碘化物、碘；

荧光猝灭剂可以在聚合反应前与荧光分子形成非共价的超分子复合物，通过能量共振转移或者电子转移机理猝灭荧光分子的荧光，从而降低本底荧光。

6.如权利要求1至5所述的任意一种检测体系，过氧化物酶选自蛋白质构成的过氧化物酶，这些酶来源于生物中。

7.如权利要求6所述的任意一种检测体系，过氧化物酶选自植物过氧化物酶。

8.如权利要求7所述的任意一种检测体系，过氧化物酶为辣根过氧化物酶。

9.如权利要求1至5所述的任意一种检测体系，该体系应用于过氧化物酶底物的检测。

10.如权利要求1至5所述的任意一种检测体系，与氧化酶联用，应用于氧化酶底物的检测；与氧化酶联用的体系特征为，不含过氧化物，含有氧化酶；

检测过程是：氧化酶可以催化底物，生成过氧化物，进而被体系中过氧化物酶催化形成自由基，进而引发单体分子的聚合反应，通过溶液粘度或荧光增强判断底物的存在。