[发明专利]一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖及其制备方法

摘要

本发明公开了一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖的制备方法。该工艺流程特征在于利用微波辅助提取浒苔硫酸多糖，经脱脂及除蛋白和色素后，依次添加多聚半乳糖醛酸酶、á‑L‑鼠李糖苷酶和木聚糖酶进行酶解，灭酶活后，采用乙醇去除酶和未降解多糖，离心上清液过分子筛，截留物冷冻干燥后得到浒苔活性寡糖。经动物药效学证实，浒苔寡糖能够显著降低高血糖模型小鼠血糖值。本发明采用非特异性商业化酶，工艺路线简单，高效且环境友好，既提高了寡糖的制备量，同时又降低了酶的消耗和生产成本，是一种制备浒苔活性寡糖的有效方法。

主权项

1.一种具有辅助降血糖作用的浒苔寡糖的制备方法，其特征在于：所述方法包括如下：（1）将浒苔干燥后粉碎，向浒苔干粉中加入60‑80%乙醇回流提取1‑2小时，干粉重量g与乙醇体积mL比为1:20‑30，回流结束后回收去除乙醇循环使用，烘干得到干燥脱脂的浒苔粉末；（2）向步骤（1）制得的脱脂浒苔粉末中加入蒸馏水，其中浒苔质量g与蒸馏水mL体积比为1:25‑30，60‑70℃萃取温度下480‑600 W微波辅助提取2‑3 min，提取结束后，进行过滤，将滤渣重复上述步骤进行2‑3次提取，将获得的滤液混合后进行浓缩，加入3‑4倍体积95%乙醇，4‑10℃静置沉淀8‑12小时后，离心收集沉淀，真空冷冻干燥后粉碎，得粗浒苔硫酸多糖；（3）向步骤（2）所得粗浒苔硫酸多糖中加入蒸馏水，其中硫酸多糖粉末质量mg与蒸馏水mL体积比为1:0.5‑1.5，进行搅拌复溶；用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一种或几种除蛋白5‑8次；（4）将步骤（3）所得到的溶液，通过HPD‑826大孔吸附树脂填充柱，洗脱液经过非极性吸附剂活性炭去除色素，活性炭使用量g与洗脱液mL按重量体积比1:30‑50，于摇床中60‑80 r/min下振荡1‑2h，6000‑8000rpm离心20‑30 min，收集上清液；（5）利用截留分子量8000‑14000透析袋，去除小分子及色素；截留液在50‑60℃及转速为40‑60 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至膏状，并进行真空冷冻干燥粉碎后，得到精浒苔硫酸多糖粉末；（6）将步骤（5）中所得精浒苔硫酸多糖粉末用蒸馏水溶解，质量体积比1:10‑25，调节pH为6.5‑8.0，加入多聚半乳糖醛酸酶后置于32‑40℃，速度为65‑90 r/min水浴摇床中酶解0.5‑1.5 h后取出，沸水加热5‑10 min以灭酶活，冷却至室温，离心取上清液备用；（7）将步骤（6）离心所得上清液调节pH为5.0‑6.5，加入α‑L‑鼠李糖苷酶后置于35‑50℃，速度为65‑90 r/min水浴摇床中酶解1‑1.2 h后取出，沸水加热5‑10 min以灭酶活，冷却至室温，离心取上清液备用；（8）将步骤（7）离心所得上清液调节pH为4.5‑6.0，加入木聚糖酶后置于50‑60℃，速度为65‑90 r/min水浴摇床中酶解0.5‑1 h后取出，沸水加热10‑15 min以灭酶活，冷却至室温，离心取上清液备用，至室温，离心取上清液备用；（9）向步骤（8）中酶解后离心所得上清液加入等体积比95%乙醇，4‑10℃静置沉淀1.5‑2.5 h后，沉降除去反应液中蛋白，离心收集上清备用；（10）向步骤（9）中酶解后离心所得上清液加入体积比1:2‑3的95%乙醇沉降除去反应液中未降解多糖，4‑10℃静置沉淀8‑10 h后，离心收集上清，在37‑40℃及转速为60‑80 r/min条件下旋转蒸发，浓缩至原体积的1/5‑1/4，即为浒苔寡糖粗品溶液；（11）将步骤（10）中浒苔寡糖粗品溶液，采用截留分子量2000D透析袋处理，收集透析液；（12）将步骤（11）中透析液采用截留分子量500D透析袋处理，将截留液冷冻干燥，制备得到浒苔活性寡糖。