[发明专利]一种亚细胞结构疫苗及其制备方法

摘要

本发明公开了一种亚细胞结构疫苗及其制备方法，本发明的亚细胞结构疫苗是基于以硼替佐米及氯化铵诱导肿瘤细胞内短寿蛋白和缺损的核糖体产物作为抗原蛋白，通过自噬途径进入双层膜结构的自噬小体中，收集这样包裹肿瘤抗原的自噬小体，再经HSP70免疫激活肽段修饰，修饰后的自噬小体即为本发明的亚细胞结构疫苗，将疫苗经淋巴结给药可以有效诱发机体免疫系统的交叉递呈，激活CD4+、CD8+ T淋巴细胞及CTL细胞，达到更好的肿瘤杀伤的作用。

主权项

一种亚细胞结构疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1，将经培养后的肿瘤细胞在含有氯化铵及硼替佐米的培养基中继续培养24‑48小时，诱导自噬小体的形成；24‑48小时后，收集全部的细胞培养物，4℃下先经1500rpm离心10分钟，去除大颗粒细胞杂质，收集离心上清；再将收集的上清经12000rpm离心15分钟；得到的沉淀经缓冲液洗涤，再次经12000rpm离心15分钟，收集沉淀并悬浮在缓冲液中；电镜下观察其结构为100‑900nm的小泡结构，即为自噬小体疫苗； 步骤2，将自噬小体疫苗中的蛋白终浓度调整为1mg/ml，与浓度为1mg/ml化学合成的HSP70_407‑426肽段混合，缓慢加入戊二醛，持续搅拌下，在4℃中反应3‑4小时；12000rpm离心15分钟去除上清中多余的戊二醛，得到的沉淀即为亚细胞结构疫苗；疫苗重悬在冻存保护液中，分装后冻存于‑80℃冰箱或液氮中备用。