[发明专利]用于病毒载体纯化的可扩缩生产平台和用于基因治疗中的如此纯化的病毒载体

摘要

用于病毒载体纯化的可扩缩生产平台和用于基因治疗中的如此纯化的病毒载体。本发明提供了用于制备高度纯化的AAV载体制剂的方法。本文所述非常纯的AAV制剂对于临床用途较优。

主权项

一种制备高度纯化的AAV载体制剂的方法，所述方法包括如下步骤：a) 收获包含重组AAV载体颗粒的细胞和细胞培养上清；b) 经由切向流过滤浓缩步骤a)中收获的所述细胞和所述细胞培养上清，以制备浓缩的收获物；c) 通过微射流裂解步骤b)中制备的所述浓缩的收获物以制备裂解液；d) 过滤步骤c)中制备的所述裂解液，以制备澄清的裂解液；e) 使步骤d)中制备的所述澄清的裂解液通过离子交换柱层析法，以制备包含纯化的AAV载体颗粒的柱洗脱液，并任选通过切向流过滤浓缩所述柱洗脱液，以制备浓缩的柱洗脱液；f) 混合所述柱洗脱液或在步骤e)中制备的所述浓缩的柱洗脱液和氯化铯以制备混合物，并将所述混合物进行离心以从空衣壳AAV载体颗粒和其它载体相关的杂质中基本分离真正的AAV载体颗粒；g) 收集在步骤f)中分离的所述真正的AAV载体颗粒，并将所述收集的真正的AAV载体颗粒通过切向流过滤进行缓冲液交换；h) 用表面活性剂配制步骤g)中得到的所述真正的AAV载体颗粒以制备AAV载体制剂；i) 过滤在步骤h)中制备的所述AAV载体制剂以制备高度纯化的AAV载体制剂，其中所述高度纯化的AAV载体制剂中至少90%的AAV载体颗粒是真正的AAV颗粒。