[发明专利]一种测定植物组织氨基酸泄漏率的方法

摘要

本发明涉及一种测定植物细胞氨基酸泄漏率的方法，其步骤包括a.试验准备；b．准确称样；c．浸提；d．离心；e．去除杂蛋白干扰；f．测定吸光度；g．计算氨基酸泄漏率。利用本方法测定生物细胞氨基酸泄漏率简单方便，整个测定工作耗时不到3.5h，可对一次试验中各处理成批测定，处理间可比性强，稳定性好，误差小，在植物抗逆性研究中应用性广，可推广应用于植物对高温、低温、辐射、重金属、盐害、干旱抗逆性鉴定研究中，也可应用于生物细胞对其他非生物胁迫因子的抗逆性鉴定研究中。

主权项

 一种测定植物组织氨基酸泄漏率的方法，其步骤是：a．试验准备根据试验处理数，准备足量5‑10ml带螺盖离心管，用无离子水洗净后烘干备用；b．准备样品处理前用蒸馏水冲洗待测植物组织，用滤纸吸干表面水分； 处理结束，准确称取各处理植物新鲜组织0.0401‑0.0509 g，置a步骤准备的离心管中； c．浸提在b步骤含植物新鲜组织的离心管中各加入4mL蒸馏水，在室温条件下，浸提2‑3 h，摇床轻摇浸提3 h；d．离心浸提结束，立即将c步骤的浸提管放置在转速为3000rev/min的离心机离心5‑10分钟；e．去除杂蛋白干扰上述d步骤离心结束，吸取浸提管中的上清液3.0 ml,转入另一测试管，加入0.3ml的72%（w/v）三氯乙酸溶液，再在3000rev/min离心5‑10分钟，以沉淀去除杂蛋白干扰；f．测定鲜组织的吸光度将e步骤离心后的测试管上清液倒入比色杯，在紫外分光光度计读取波长280nm的吸光度值A280nm，空白为蒸馏水，获得鲜组织在波长280nm的吸光度值A280nm，测定后将比色杯液体倒回测试管中；g.高压灭杀将e步骤吸取上清液后留有植物组织和1ml浸提液的浸提管上盖置高压灭菌锅灭杀20min，浸提管称灭杀管；h.合并离心将e步骤测试管测试液全部回倒入其g步骤对应灭杀管中，合并后再在3000rev/min离心5‑10分钟，以沉淀去除杂蛋白干扰；i.测定杀死组织的吸光度将上述h步骤合并离心的灭杀管上清液倒入比色杯，空白为蒸馏水，再次测定吸光度值A_k280nm，即为杀死样品在波长280nm的吸光度值A_k280nm；j．计算氨基酸泄漏率氨基酸泄漏率为各处理鲜组织在波长280nm的吸光度值A280nm占杀死样品在波长280nm的吸光度值A_k280nm的比率，按下列公式计算：氨基酸泄漏率（%）=A280nm×100/A_k280nm。