[发明专利]一种测定植物组织氨基酸泄漏率的方法

权利要求书

1.一种测定植物组织氨基酸泄漏率的方法，其步骤是：

a．试验准备

根据试验处理数，准备足量5-10ml带螺盖离心管，用无离子水洗净后烘干备用；

b．准备样品

处理前用蒸馏水冲洗待测植物组织，用滤纸吸干表面水分；处理结束，准确称取各处 理植物新鲜组织0.0401-0.0509g，置a步骤准备的离心管中；

c．浸提

在b步骤含植物新鲜组织的离心管中各加入4mL蒸馏水，在室温条件下，浸提2-3h，摇 床轻摇浸提3h；

d．离心

浸提结束，立即将c步骤的浸提管放置在转速为3000rev/min的离心机离心5-10分钟；

e．去除杂蛋白干扰

上述d步骤离心结束，吸取浸提管中的上清液3.0ml,转入另一测试管，加入0.3ml的 72%（w/v）三氯乙酸溶液，再在3000rev/min离心5-10分钟，以沉淀去除杂蛋白干扰；

f．测定鲜组织的吸光度

将e步骤离心后的测试管上清液倒入比色杯，在紫外分光光度计读取波长280nm的吸光 度值A280nm，空白为蒸馏水，获得鲜组织在波长280nm的吸光度值A280nm，测定后将比色杯 液体倒回测试管中；

g.高压灭杀

将e步骤吸取上清液后留有植物组织和1ml浸提液的浸提管上盖置高压灭菌锅灭杀 20min，浸提管称灭杀管；

h.合并离心

将e步骤测试管测试液全部回倒入其g步骤对应灭杀管中，合并后再在3000rev/min离 心5-10分钟，以沉淀去除杂蛋白干扰；

i.测定杀死组织的吸光度

将上述h步骤合并离心的灭杀管上清液倒入比色杯，空白为蒸馏水，再次测定吸光度值 A_k280nm，即为杀死样品在波长280nm的吸光度值A_k280nm；

j．计算氨基酸泄漏率

氨基酸泄漏率为各处理鲜组织在波长280nm的吸光度值A280nm占杀死样品在波长 280nm的吸光度值A_k280nm的比率，按下列公式计算：

氨基酸泄漏率（%）=A280nm×100/A_k280nm。