[发明专利]一种苦瓜蛋白肠溶片的制备工艺

摘要

一种苦瓜蛋白肠溶片的制备工艺，将种子去壳，然后放入研钵中加入液氮进行研磨；接着使用CTAB法得到全基因组；根据苦瓜蛋白MAP30的基因序列设计相关引物，确定PCR的条件及体系；PCR产物回收后进行TA克隆，导入感受态细胞DH5α，筛选出阳性菌落，培养后进行双酶切；过夜培养PET‑28a，提取表达质粒，进行酶切；将经双酶切过后的目标DNA片段和表达质粒片段在solution Ⅰ体系下进行过夜连接；接着将其导入BL21(DE)感受态细胞中，筛选出阳性菌落；将阳性菌落放大培养并在IPTG的诱导下进行蛋白的表达；将蛋白进行纯化干燥；得到目标蛋白MAP30将作为主要的有效成分与一系列辅料共同制成有保健功能的苦瓜蛋白肠溶片；本发明的苦瓜片中有效蛋白MAP30的含量高，更能促进人体的健康。

主权项

一种苦瓜蛋白肠溶片的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：苦瓜原料的处理：取适量的成熟苦瓜中的种子，除去种子壳，然后放入研钵中，加入适量的液氮研磨成粉末状，分装得到处理后苦瓜种子粉；步骤二：苦瓜种子粉的处理：将步骤一中分装后的苦瓜种子粉，利用CTAB法提取得到苦瓜全基因组，作为PCR反应的模板；步骤三：PCR反应的确定：首先根据相关苦瓜蛋白MAP30的基因序列设计相关的引物，并最终确定PCR的条件及体系；步骤四：TA克隆：PCR产物回收后进行TA克隆，并导入感受态细胞DH5α，经蓝白斑筛选、菌落PCR，筛选出阳性菌落，提取目标DNA片段后进行双酶切；步骤五：表达载体的处理：过夜培养PET‑28a，提取表达质粒，并用与步骤四相同的两种酶进行酶切；步骤六：连接：用步骤四与步骤五中相同酶切的片段在solution Ⅰ的体系中进行过夜连接；步骤七：将步骤六中的过夜连接的产物导入感受态细胞BL21(DE)，经蓝白斑筛选、菌落PCR，筛选出阳性菌落；步骤八：将步骤七中筛选出的阳性菌落放大培养并在IPTG的诱导下进行苦瓜蛋白MAP30的表达；步骤九：发酵培养后，经一系列处理将步骤八得到的的苦瓜蛋白 MAP30进行纯化干燥；步骤十：制肠溶片：首先将步骤九中确定发酵得到的苦瓜蛋白MAP30与辅料的比例，最后经粉碎、过筛、配料、混合、湿法制粒、颗粒干燥、压片、包肠溶衣、包装后储存。