[发明专利]一种竹叶石斛种子快速繁殖方法

摘要

本发明属于植物组织培养技术领域，公开了一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，包括预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段四个阶段。本发明提供的竹叶石斛种子快速繁殖方法，在种子萌发阶段，45d即可出现大量原球茎，种子萌发率高达95％；在原球茎分化阶段，分化出小苗的时间控制在60d以内，最优可到50d；在生根壮苗培养阶段，45d左右组培苗长到3cm以上，根的条数为2条以上。从种子萌发到无菌苗生根，达到炼苗移栽要求，这一周期的时间在150d以内，大大加快了竹叶石斛种子繁殖速度，为竹叶石斛的快速生产提供了便利。

主权项

1.一种竹叶石斛种子快速繁殖方法，其特征在于：包括预处理阶段、种子萌发培养阶段、原球茎分化培养阶段和生根壮苗培养阶段四个阶段，具体步骤如下：步骤(1)、预处理阶段：竹叶石斛的成熟果荚表面依次用75％酒精、0.1wt％升汞消毒，再用无菌水处理，再将果荚浸入75％酒精，取出除去果荚表面水分，置于灭过菌的接种盘中，切开果荚，取出种子；步骤(2)、种子萌发培养阶段：将种子接种于种子萌发培养基中萌发，培养温度为25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d；培养45d得到原球茎；所述的种子萌发培养基为1/2MS培养基；步骤(3)、原球茎分化培养阶段：原球茎采用原球茎分化培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为12h/d，培养50d使原球茎分化出竹叶石斛小苗；所述的原球茎分化培养基以1/2MS培养基为基础培养基，加入6-BA和NAA，其中6-BA的浓度为2.0mg/L，NAA的浓度为0.2mg/L，原球茎分化培养基的pH值为5.8～6.0；步骤(4)、生根壮苗培养阶段：原球茎分化培养阶段得到的竹叶石斛小苗采用生根壮苗培养基进行培养，培养温度为25℃～27℃，光照强度2000lx～3000lx，光照时间12h/d，培养40d～50d得到组培苗；所述的生根壮苗培养基以1/2MS培养基为基础培养基，加入NAA，NAA的浓度为0.7mg/L；生根壮苗培养基的pH值为5.8～6.0；步骤(5)、炼苗移栽阶段：培养在三角瓶中的组培苗在自然光条件下炼苗7d后，先半打开封口膜1d，再完全开瓶炼苗2d；取出组培苗，用清水洗净组培苗根部残留的培养基，并用0.1mg/LNAA水溶液蘸根2～3min，然后移栽至木屑：草炭＝3：1的基质中，根部封土，浇透水，罩上塑料膜进行保温保湿；1周后，撤去塑料膜；湿度控制在75～90％，温度为20～28℃；其中，所述的1/2MS培养基的配制方法为，大量元素母液配制成50倍，其中CaCl2·2H2O需要单独配制置于另一小口瓶中；有机物质、微量元素及Fe盐母液分别配制成100倍，其中Fe盐母液需放置在棕色瓶中保存；蔗糖的质量浓度为30g/L，琼脂的质量浓度7.0g/L；培养基的pH 5.8-6.0，配制时根据配制的体积和浓缩的倍数量取所需量；配制完成后放入高温灭菌炉中121℃灭菌20min，放在4℃低温冰箱中保存，保存期限最长1个月左右，如果母液中出现絮状物质时，需重新配制；具体配制方式如下表所示：