[发明专利]大肠杆菌细胞内原位进化目标蛋白质的新方法在审
| 申请号： | 201610053310.9 | 申请日： | 2016-01-27 |
| 公开（公告）号： | CN106011162A | 公开（公告）日： | 2016-10-12 |
| 发明（设计）人： | 徐志南;濮悦;黄磊;杭宝建;董昌;蔡瑾 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 刘晓春 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种在大肠杆菌细胞内原位进化蛋白质的新方法。首先制备目标蛋白质分子中特定氨基酸位点的寡核苷酸饱和突变单链库，或制备目标蛋白质分子的同源双链或单链DNA突变库；将上述突变库转化含有目标基因或已经整合目标基因的大肠杆菌，通过λ‑Red同源重组技术，建立含目标基因突变库的大肠杆菌菌群；再次将DNA突变库转化上述得到的大肠杆菌，形成更大库容量的大肠杆菌突变库；循环操作上述过程3‑30次，构建含有目标基因突变的大肠杆菌基因组突变库；最后通过高效筛选或高通量筛选获得多种目标蛋白质突变体。这一技术可应用于微生物单个基因原位进化或多个目标基因的同时原位进化，提高酶催化活性，并应用于提高微生物代谢产物的产率。 | ||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 细胞内 原位 进化 目标 蛋白质 新方法 | ||
【主权项】：
一种在大肠杆菌细胞内原位进化蛋白质的新方法，其特征在于所述方法包括构建包含一个或多个突变位点的核酸库，包括体外合成的寡核苷酸单链库或制备的单链DNA库或双链DNA库，通过λ‑Red同源重组技术，利用所述核酸库对大肠杆菌胞内载体上或基因组上的一个或多个结构基因进行原位重组，以较高的突变率达到进化酶分子结构提高酶催化效率的目的。
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