[发明专利]一种大鼠股骨内血管3D结构重建实验方法

摘要

本发明公开了一种大鼠股骨内血管3D结构重建实验方法，通过对所选取实验大鼠的预处理、注射造影剂、脱钙制备脱钙股骨标本、MicroCT系统整体扫描二维重建、3D结构图像重建观察大鼠股骨内血管形态结构，并进一步计算实验大鼠的血管直径的大小范围为14.8um‑532.8um。发明具有操作简单，时间短及无危害性等优点，而且得到了逼真直观，清晰可见的血管三维结构重建图，更加易于观察和分析。通过动物大鼠股骨内血管3D重建可以为股骨头颈区骨折的患者在选择手术方式上提供更为可靠的影像诊断依据，可进一步评估患者发生股骨头坏死或者骨不愈合的几率，对预后做出一个较为可靠的预估。

主权项

1.一种大鼠股骨内血管3D结构重建实验方法，其特征在于，包括以下步骤：1).配制造影剂：首先，分别取40ml的MV‑120BLUE试剂和50ml的MV DIELUEN试剂按照4:5体积混合均匀得混合液备用；然后，在使用前20min往该混合液中加入总体积5％的(4.5ml)MV CURING AGENT试剂，再次混合搅拌均匀，得造影剂备用；2).灌注造影剂：实验大鼠采用0.05ml/10g浓度为10％的水合氯醛腹腔注射实施全身浅麻醉，确定所需麻醉深度后，摆好实验大鼠手术体位为仰卧位，剪去实验大鼠腹部区域毛发，沿左侧肋弓腹膜，紧贴结扎脾门，取出脾脏放入无菌试管，放在冰水混合液中，待做细胞培养；之后，贴近胸壁，剪开胸腔，半分钟内完成穿刺，灌注1ml生理盐水加肝素，灌注到一半时大鼠血容量增加，右心耳隆起，将右心耳剪个小口，把血液放出；同样的方法，第二次灌注4％甲醛，第三次灌注生理盐水加肝素冲洗血管，直至流出液清澈；第四次灌注造影剂，直至流出乳白色液体，关闭右心耳小口，完成造影剂灌注；3).制作标本：a).截取：将经步骤2)处理的实验大鼠依次分离皮肤肌肉，暴露整根后肢股骨，上至髋关节下至胫骨，分离髋关节和膝关节,得大鼠股骨备用，在操作过程中注意保护好股骨的完整性；b).固定：将步骤a)处理的大鼠股骨放入大约其5倍体积的浓度4％的多聚甲醛溶液中，浸泡24‑48h，然后取出放入70％或者75％酒精溶液中浸泡备用；c).脱钙：将步骤b)处理的大鼠股骨从酒精溶液中取出，放入到10％EDTA脱钙液中，利用超声脱钙仪脱钙2‑3天,得脱钙标本，并将该脱钙标本再次放入70％或75％的酒精溶液中保存备用；4).MicroCT扫描：将步骤3)的脱钙标本在酒精溶液中保存0.5h后取出，采用瑞士SCANCO公司生产的型号为：uCT‑100的MicroCT进行脱钙标本整体扫描得二维图像，设置扫描参数如下：千伏峰值：45kvp，电流值：200uA，分辨率：14.8um，曝光时间：300ms；5).3D结构重建：运用uCT‑100自带的VMS系统、Xming和PuTTY_V0.63软件对扫描得到的二维图像数据进行分析，在根据股骨标本脱钙后的软组织和造影剂的密度不同，设置不同的阈值，从而通过程序运行实现股骨血管的3D重建，得到完整的股骨血管3D图像，根据完整的股骨血管3D图像利用软件对所选取的所有成年大鼠的所有股骨标本的血管进行计算，统计分析后得出：所有成年大鼠的所有股骨标本的血管直径的大小范围为：14.8um‑532.8um。