[发明专利]一种利用赤霉菌合成11α;15α-diOH-沃氏氧化物的方法

摘要

本发明属生物技术领域，具体涉及利用赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3‑1转化底物沃氏氧化物为11α,15α‑diOH‑沃氏氧化物的方法。该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.4903。赤霉菌(Gibberella intermedia)CA3‑1能转化沃氏氧化物为11α,15α‑diOH‑沃氏氧化物，在底物投料浓度为4g/L时，沃氏氧化物转化率高达90％，11α,15α‑diOH‑沃氏氧化物的得率为68.76％。11α,15α‑diOH‑沃氏氧化物的合成为甾体药物及其中间体的研究提供了更多元化的前体，具有一定的研究价值和市场意义。

主权项

1.一种利用赤霉菌CGMCC No.4903转化沃氏氧化物为11α,15α‑diOH‑沃氏氧化物的方法，其特征为：该菌株为赤霉菌（Gibberella intermedia）CA3‑1，保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国科学院中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.4903，保藏日期为2011年5月24日，分类命名为Gibberella intermedia；转化制备方法如下：（1）将赤霉菌作为生产菌种从PDA平板上接入到种子培养基中，25~35°C，150~220 r/min条件下培养12~20 h，得到种子液；种子培养基的成分及配比为葡萄糖10~30 g/L；酵母粉5~15 g/L；NaCl 0.5~2 g/L；KH2PO4 1~5 g/L；调 pH至 7.0，121°C高压蒸汽灭菌15~20 min；（2）将种子液以体积百分比4%~ 8%的接种量接种于发酵培养基，装液量为250 mL锥形瓶中装25~50 mL发酵培养基，培养温度25~35°C，在150~220 r/min转速下培养20~24 h，得发酵液；发酵培养基的成分及配比为葡萄糖10~30 g/L；酵母粉5~15 g/L；玉米浆1~5 g/L；pH自然，121°C高压蒸汽灭菌15~20 min；（3）制备赤霉菌CGMCC No.4903的静息细胞：将步骤（2）中得到的发酵液中培养好的菌体用0.2M PBS缓冲液洗涤3次，然后重悬于新鲜的30mL/250mL PBS缓冲液；（4）准确称取适量沃氏氧化物加入到步骤（3）的静息细胞中，使沃氏氧化物终浓度为4~8g/L，在转化温度28℃，200~220r/min转速下转化48~72 h，即得转化液。