[发明专利]一种提取古代生物骨骼DNA的裂解液及方法

摘要

本发明公开了一种提取古代生物骨骼DNA的裂解液及方法。所述裂解液配方：pH8.5Tris‑HCl，10mM；EDTA，10‑15mM；SDS，1.0‑1.5wt％；NaCl，150mM；蛋白酶K，0.3‑0.5mg/ml。通过将SDS、EDTA和蛋白酶K的组分分别提高，可明显提高新裂解液对骨组织的裂解程度。同时在使用时再利用去蛋白液，DNA漂洗液处理，以及DNA离心柱法可明显减少DNA样品中的杂质成分，有利于提高PCR的扩增效果，从而有助于获取高纯度古代生物骨骼的DNA。

主权项

1.一种提取古代生物骨骼DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)剪取一小块出土的古代人骨骼，将其碾碎，称取0.3‑0.4g放入1.5ml的EP管中；2)加入250‑300μl的裂解液，55‑57℃孵育12–16h；3)12000rpm离心10‑15min，取200‑250μl上清液入新EP管，按照体积比1:1加入250μl异丙醇，轻轻混匀后4℃静置至少10min；4)轻轻吹打混合液，并将混合液转移至离心柱，12000rpm离心1‑2min，弃收集管内的液体；5)加入500μl去蛋白液，12000rpm离心1min，弃收集管内废液；6)加入600μl的漂洗液，12000rpm离心1min，弃收集管内废液，并重复一次操作，本步骤操作前，须预先在漂洗液中加入3倍体积的无水乙醇；7)打开盖子，24‑26℃至少风干10–15min；8)加入75℃预热的去离子水30‑50μl洗脱DNA；9)将收集的DNA液加入离心柱内，相同条件下再次洗脱；所述裂解液配方是在去离子水中溶解：pH8.5Tris‑HCl，10mM；EDTA，10‑15mM；SDS，1.0‑1.5wt％；NaCl，150mM；蛋白酶K，0.3‑0.5mg/ml。