[发明专利]一种高纯度心肌细胞原代培养方法

摘要

本发明提供了一种高纯度心肌细胞原代培养方法，适用于生物技术领域及医学领域。具体而言，首先将离体的乳鼠心脏剪成组织碎片；将组织碎片采用改进配置的酶消化液进行多次分量的消化，制得心肌细胞悬液后重悬，然后将心肌细胞接种在培养皿A中进行差时贴壁；再吸取培养皿A中的心肌细胞悬液到培养皿B中，清洗培养皿A中沉于皿底但未贴壁的心肌细胞并重悬，然后转入到培养皿B中进行培养。本发明与现有技术相比具有以下优点：1.方法简单有效。2.可操作性强。3.所获得心肌细胞数量多，纯度高，贴壁率好，存活率高。

主权项

一种高纯度心肌细胞原代培养方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、将离体的乳鼠心脏转入盛有DMEM/F12基础培养基的培养皿中，将心脏剪成组织碎片；(2)、将组织碎片转入EP管中，加入酶消化液，所述的酶消化液由Ⅱ‑型胶原酶、胰蛋白酶以及PBS缓冲液组成，酶消化液中Ⅱ‑型胶原酶的质量百分比浓度为0.04％，胰蛋白酶的质量百分比浓度为0.09％；(3)、将EP管置于35～40℃水浴条件中进行第一次消化，消化时间为6～10分钟，消化完毕后吸取上清液后并弃去；(4)、将EP管继续置于35～40℃水浴条件中，继续加入酶消化液进行后续消化，消化时间为10～12分钟，消化完毕后吸取上清液后并将上清液放置于离心管中，所述离心管中预先放置了含有胎牛血清的DMEM/F12完全培养基，离心管置于冰上；(5)、重复步骤(4)，循环提取上清液，直至EP管中的组织碎片变白并变小后，完成上清液的收集，离心管中所收集的上清液即为心肌细胞悬液；(6)、将收集好的心肌细胞悬液离心并除去上清，再加入DMEM/F12完全培养基，进行心肌细胞重悬，制得心肌细胞重悬液；(7)、然后将心肌细胞接种在培养皿A中进行差时贴壁1～1.5h；(8)、吸取培养皿A中的心肌细胞悬液到培养皿B中，清洗培养皿A中沉于皿底但未贴壁的心肌细胞并重悬，然后转入到培养皿B中进行培养。