[发明专利]一种薄荷多倍性的鉴定方法

摘要

本发明设计一种薄荷多倍性的鉴定方法，选取当年生植株叶片作为外植体，诱导愈伤组织作为观察材料，对其进行前处理，染色压片后显微计数，鉴定倍性。本发明确定了用于倍性观察的分生组织的培养与选择方法及压片处理方法。该方法简便有效，细胞易于分散、有丝分裂中期相细胞比例高易于寻找，有利于染色体的分散。适合于薄荷这种染色体数目多、型态小的倍性复杂植物。

主权项

一种薄荷多倍性鉴定的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）分生组织准备：选取当年生植株叶片作为外植体，冲洗干净后，进行消毒；切取0.5×0.5 cm大小，将其接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织的诱导，培养温度为18‑24 ℃，首先在黑暗中培养24 h，然后进行正常培养15‑20 d；所述正常培养条件为：温度18‑24 ℃，光照强度为1600‑2000 lx光照时间为8‑10 h/d，；所述诱导培养基为MS培养基并添加激素2,4‑D和KT；所述诱导培养基中2,4‑D浓度为1.0‑6.0 mg/L，KT浓度为0.5‑1.0 mg/L；将得到的薄荷叶片切口边缘愈伤组织切割后接入继代增殖培养基中进行继代培养25‑35 d，培养温度为20‑26 ℃，光照时间为10‑16 h/d，光照强度为1600‑2000 lx；所述继代增殖培养基为MS培养基并添加激素2,4‑D 和KT；所述继代增殖培养基中2,4‑D浓度为2.0‑4.0 mg/L，KT浓度为1.0‑2.0 mg/L；（2）分生组织的处理：取步骤（1）中增殖旺盛的愈伤组织，切割后浸泡于含有0.1‑0.2 %秋水仙素溶液中2‑6 h后取出，蒸馏水清洗表面溶液后用乙醇‑冰醋酸浓度比（3:1）固定液固定24 h后取出蒸馏水清洗表面溶液；充分清洗至无味后用2.5%混合酶液酶解室温下2‑4h；蒸馏水洗去酶液后于新鲜蒸馏水中浸泡30min；（3）分生组织细胞压片：取步骤（2）中处理后的愈伤组织于载玻片上用镊子将其压碎，去除大块残碎材料，加入改良的苯酚品红溶液染色后将载玻片在酒精灯上加热，染色完成后用45%醋酸溶液分色，加上盖玻片后用镊子轻敲盖片使细胞分散均匀；上述诱导培养基、继代增殖培养基中均含有琼脂6.0‑7.0g/L、蔗糖25‑35g/L，且pH值为5.6‑5.8。