[发明专利]一种抗牙周病抗体的制备方法及其应用

摘要

一种抗牙周病菌抗体的制备方法，是取牙龈卟啉单胞菌，制得菌体佐剂抗原，将取牙龈卟啉单胞菌与等量的福氏佐剂混合，制得菌体佐剂抗原。再每次取牙龈卟啉单胞菌抗原1-5ml，对哺乳动物进行多点注射，采集血清，制得抗牙龈卟啉单胞菌抗体IgG粗提物。最后将抗牙龈卟啉单胞菌抗体IgG粗提物离心纯化制得抗牙龈卟啉单胞菌抗体IgG纯品。本发明使抗体的生产成本降低，抗体效价提高。本发明的另一目的，是抗牙龈卟啉单胞菌抗体IgG的应用。提供以本发明制备的抗牙龈卟啉单胞菌抗体IgG和抗菌剂作为被动免疫的效成份用于预防牙周病的发生。

主权项

一种抗牙周病菌抗体的制备方法，其特征在于包括下述步骤：（1）取牙龈卟啉单胞菌，在BHI培养基中厌氧培养5‑7天；将培养好的牙龈卟啉单胞菌进行离心处理，收集菌体，用pH6‑7、浓度为0.05‑0.2M的磷酸缓冲生理盐水洗涤菌体4‑6次，50‑65℃的温度下，加热25‑35分钟，进行灭活处理，得到牙龈卟啉单胞菌液；将牙龈卟啉单胞菌液和等量的福氏佐剂混合，用匀浆器处理，制得菌体佐剂抗原；（2）、根据脯乳类动物种类，每次取牙龈卟啉单胞菌抗原1‑5 ml，对动物进行淋巴结和背部皮下多点注射，共注射三次，每次间隔三周；末次免疫后20天，经检测效价合格后采集血清，取免疫血清搅拌下加入适量盐水稀释，调节pH值至7.5‑8.5，加入等量饱和硫酸铵溶液，在2‑8℃温度下静置20‑30小时，高速离心20‑30分钟，取其沉淀，经复融超滤浓缩除盐、除菌后冷冻干燥，即得抗牙龈卟啉单胞菌抗体IgG粗提物；（3）、将抗牙龈卟啉单胞菌抗体IgG粗提物离心纯化后，再经DEAE‑Sephadex A50层析柱纯化；用含 NaCl的磷酸缓冲液进行连续或分段梯度洗脱，收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集有抗体活性的蛋白洗脱液，调节蛋白含量为20mg/ml；将前一步骤所得的蛋白洗脱液再经Sephadex G200凝胶柱层析纯化，用含 NaCl的磷酸缓冲液进行洗脱，收集各蛋白洗脱峰，并以ELISA检测各蛋白的抗体活性；收集有抗体活性的蛋白洗脱液，经0.22μ膜过滤除菌，冷冻干燥，即得抗牙龈卟啉单胞菌抗体IgG纯品。