[发明专利]一种用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒及方法

摘要

本发明涉及一种用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒及方法，所述方法包括如下步骤：(1)引物和探针的设计合成；(2)、PCR反应组分，(3)、PCR扩增；(4)、熔解曲线分析。本发明利用荧光PCR和熔解曲线分析技术平台，创新性地应用带有核酸修饰的新型双标记和双特异性的探针检测临床常见12种分枝杆菌菌种，实现了各菌种间至少在一个检测通道中的Tm值之差大于等于4℃，可以准确有效的鉴定两种或多种菌同时存在的复合菌。

主权项

1.一种用于鉴定分枝杆菌菌种的试剂盒，其中鉴别试剂包括三对引物和五条探针，所述引物包括上游引物primer1、下游引物primer2、上游引物primer3、下游引物primer4、上游引物primer5和下游引物primer6；引物primer1、primer2、primer3、primer4、primer5和primer6的核苷酸序列分别如下表1所示；所述探针包括3个区域：与所述靶核酸序列互补的5’端单链靶核酸序列结合部位作为第1区域；与所述靶核酸序列互补的3’端单链靶核酸序列结合部位作为第2区域；与所述5’端和所述3’端结合部位相连接的非结合突起部位作为第3区域；所述五条探针分别为Probe1、Probe2、Probe3、Probe4和Probe5；其寡核苷酸序列分别如下表1所示：表1其中，所述FAM：一种荧光基团，激发光波长495nm，发射光波长521nm；BHQ1 dT：标记了淬灭基团BHQ1的胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸；PO4：表示磷酸化修饰；HEX：一种荧光基团，激发光波长535nm，发射光波长556nm；BHQ2 dT：标记了淬灭基团BHQ2的胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸；ROX：为一种荧光基团，激发光波长575nm，发射光波长602nm；“＝”表示该位置为锁核酸(LNA)修饰的非自然核苷酸；以“//”表示为中间标记；“______”表示为非结合突起部位的核苷酸。