[发明专利]基于LRBA基因检测抗CTLA-4抗体药物疗效的试剂盒

摘要

基于LRBA基因检测抗CTLA-4抗体药物疗效的试剂盒，所述试剂盒中包括：（1）核酸释放剂；（2）内标；（3）PCR反应液；（4）酶混合液；（5）LRBA阳性对照；（6）LRBA阴性对照。本发明试剂盒是检测抗CTLA-4抗体药物治疗黑色毒瘤疗效的有效工具，使用本发明试剂盒，可检测LRBA基因突变情况，实现对抗CTLA-4抗体药物治疗黑色毒瘤疗效的检测，填补市场空白。

主权项

一种基于LRBA基因检测抗CTLA‑4抗体药物疗效的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括：(1)核酸释放剂：为一种无菌水溶液，由60～100mmol/L的氯化钾、0.01～2wt％的十二烷基磺酸钠和0.05～1wt％的乙醇组成；所述百分比以无菌水的质量为计算基准；(2)内标，序列为：5’‐CTGGACTTAAATCCTATTGTTCCAGTCCTGTCATCCAGTTAGCTGACTCACGTATTCGTAGCCACCCTTCTGGAGGTGCAATCTAACCTATGTCATCAG‐3’；(3)PCR反应液，包括以下三组由用于靶多核苷酸扩增的上游引物、下游引物和用于靶多核苷酸检测的探针组成的组合物，所述三组组合物分别为：组合物1:上游引物11：5’‐TGGCCTCAAGCAGTTCTCCCACTTTG‐3’下游引物12：5’‐TACCCCCTTTACCAGTCATTGTCTTC‐3’探针13：5’‐TGGATTCTAATCCTCAAGATATCCACCC‐3’组合物2：上游引物21：5’‐TACATAGGGTTTGACTTTATTATTT‐3’下游引物22：5’‐GTCTCAGCCTGCAGAGTAGCTGGG‐3’探针23：5’‐TAGAGACAGGGTTTCCCCATGTT‐3’组合物3：上游引物31：5’‐ATTACAGGTGCCTGCCACCATGCCT‐3’下游引物32：5’‐CCTTTCACCTATCGCACGAGTATCAT‐3’探针33：5’‐TTTTTGTTTTGCTCTTGTCATTACTGGAG‐3’；其中组合物1针对6745G>T，组合物2针对7516C>T，组合物3针对7604C>T；所述PCR反应液中还包括用于内标检测的上游引物、下游引物和探针，其序列分别为：内标上游引物：5’‐GACCAGCTCCATCCTAAGGTTCCAG‐3’内标下游引物：5’‐CTGATGACATATTTGAGATTGCACC‐3’内标探针：5’‐TTGCTGACTCACGTATTCGTAGCCCA–3’；所述PCR反应液中还包括脱氧核糖核苷三磷酸dNTP；(4)酶混合液：包括耐热DNA聚合酶1～5U/μl和尿嘧啶DNA糖基化酶0.5～2U/μl；(5)LRBA阳性对照：为针对3种突变位点所在区域合成质粒的混合物，以及包含内标目的序列片段的质粒，其中组合物1针对6745G>T，组合物2针对7516C>T，组合物3针对7604C>T；所述阳性质粒序列为：AGAGGTTACCCTGCGCCTAGAACCTGCACGAGAGTGGGGGAGGAGTGAGCCTGTTCGGGGGCCTCTTGGACCTGCCTTCACCCAGAACCCAGCTTTTTGAGCCCGGGAGAAGCGGGTGGCTAGTAGTGGGGTGCCTTTAGTAACTTACTTGACCGACAATAACTATTTCCCTCTTGTCCCCTCAAAACCCTAAAACAAAACCTAGCCTATTTAACATATATTTAATCTTCCAATAGGGTTTGGCGTTGTTGTCAGCCTCGGGGAGAGAGATTGGACAAATATTCTCCAAGAGGAGGAGGGCGACGCCAAGGACTTTCCACATCAACTGCTTTGGGGTATCTCCACAAGTTGGAAGAGGGACCCTTTCGTTTTGCATTGCGTGTGTTGTGCTCATTACCAGTGCAGCGACTGCCGTCCCAGGGTGACTCTGAGTTGTCCTTTATCGTGAGCTAGCAATGGCTAGCGAAGACAATCGTGTCCCTTCCCCGCCACCAACAGGTGATGACGGGGGAGGTG；(6)LRBA阴性对照：为以灭菌生理盐水稀释的内标目的序列片段的质粒。