[发明专利]基于AgNCs/HpDNA探针的microRNA SDA检测用SDA反应液

摘要

本发明公开了一种基于AgNCs/HpDNA探针的microRNA SDA检测用SDA反应液，特别是一种胃癌血浆miRNA标志物miR‑16‑5p、miR‑19b‑3p双重SDA检测用SDA反应液，更具体为一种基于发夹型DNA模板合成银纳米团簇探针结合等温扩增进行microRNA检测用SDA反应液；本发明利用发夹型DNA模板合成银纳米团簇，并将其作为新型分子信标，在引物垂悬端富G序列介导的链取代等温扩增反应中，借助杂交产生的富G荧光增强效应，实现对两种胃癌血浆miRNA标志物的双重检测；特异性高、反应时间短、用料少、操作步骤简便，为建立快速简便的新型miRNA检测方法开辟了新方向。

主权项

1.一种用于胃癌血浆miRNA标志物miR‑16‑5p、miR‑19b‑3p双重SDA检测方法中的SDA反应液，其特征在于，所述SDA反应液的总体积为50μL，其中，余量为无酶水；所述缓冲液1×Nb2.1包括50mM NaAc、10mM Tris‑HAc、10mM Mg(Ac)2和100μg/mLBSA，缓冲液pH 7.9；所述AgNCs/HpDNAs分子探针中，用于检测miR‑16‑5p的HpDNA的序列如SEQ ID NO：1所示，用于检测miR‑19b‑3p的HpDNA序列如SEQ ID NO：5所示；所述AgNCs/HpDNAs分子探针含三个区，分别为颈区HpS、环区HpL和3’垂悬区HpO；其中，垂悬区富含C序列用于合成AgNCs，且序列为5’‑CCCTTAATCCCC‑3’或5’‑CCCCCCCCCCCCCCCGCCCGCC‑3’的HpO在杂交作用下与互补链中的富G垂悬序列靠近而分别得到红色或绿色荧光增强信号；SDA反应中，用于检测miR‑16‑5p的引物序列如SEQ ID NO：3所示 ，用于检测miR‑19b‑3p的引物序列如SEQ ID NO：7所示 ；所述引物的序列由两个区域组成，分别为颈区互补区PSc和富G序列垂悬区PO；所述富G序列垂悬区的序列为5’‑GGGTGGGGTGGGGTGGGG‑3’；所述检测方法包括：以AgNCs/HpDNAs为分子探针，在含富G序列垂悬端的上述引物作用下进行SDA反应，借助富G序列杂交荧光增强效应，在580nm，490nm和430nm波长激发下，实现miR‑16‑5p、miR‑19b‑3p同时检测；其中，所述miR‑16‑5p的序列如SEQ ID NO：2所示；所述miR‑19b‑3p的序列如SEQ ID NO：6所示。