[发明专利]一种普适性的流感疫苗及其制备方法

摘要

本发明涉及一种新型流感疫苗及其制备方法,本发明将流感病毒HA基因转染真核细胞后，真核表达修饰后的流感血凝素(HA)蛋白插入宿主细胞质膜上，再通过表面活化剂诱导细胞出芽的方法，产生了较大的展示流感病毒包膜糖蛋白的囊泡，经纯化和再一次加入表面活化剂处理后，使其变为尺寸均一、可控的、纳米级的拟态病毒囊泡。同时通过稳定表达HA的细胞株的建立和生物反应器的使用，本方法也适用于大规模的流感疫苗生产。本发明该方法简单易行，可以展示大多数的流感病毒(包括禽流感和猪流感)的血凝素蛋白，具有良好的普适性，有巨大潜力可用于新出现的高致死性流感病毒疫苗的设计。

主权项

一种拟态流感病毒囊泡的制备方法,包括以下步骤：（1）取在细胞质膜上稳定表达流感病毒抗原HA的稳转MDCK细胞株；（2）将0.015‑0.02%的去氧胆酸钠加入到步骤（1）的细胞中，混合30min后，再使用漩涡震荡器，高速旋转，通过去氧胆酸钠诱导细胞出芽，产生展示抗原HA的囊泡；(3) 加入PMSF蛋白酶抑制剂后，囊泡通过差速离心法进行纯化，先分别用800g、2000g、4000g离心5min，去除细胞核和细胞器,然后使用25000g离心30min，去除上清，从而获得展示抗原HA的囊泡；（4）将上述纯化好的展示抗原HA的囊泡在PBS溶液中吹打悬浮后，与0.045%的去氧胆酸钠和0.05%的曲拉通X‑100在PBS溶液中混合30min后并超声15s，产生尺寸均一的拟态流感病毒囊泡，‑80℃保存备用。