[发明专利]一种基于磁性微球的抗体分离的方法

摘要

发明公开了一种基于磁性微球的抗体分离的方法。具体步骤如下1)磁性微球基质制备。2)磁性微球基质的活化。3)功能配基的偶联。4)将微球加入单抗细胞液中，并在振荡混合吸附抗体。5)用磁铁在三角瓶外壁吸住微球，倾倒掉细胞液，平衡缓冲液冲洗。6)加入解吸缓冲液，充分振荡，用磁铁从三角瓶外壁吸住微球，收集含有产品的解吸缓冲液。本发明所研制的具有疏水性电荷诱导效应的新型磁性微球，结合了疏水性电荷诱导效应和磁性响应的特点，具有高蛋白载量、解吸条件温和以及分离操作简便等优点，可用于直接从含有固体杂质的料液中高效分离抗体。

主权项

一种基于磁性微球的抗体分离的方法，其特征在于包括如下步骤：1)按照质量比2∶1∶1∶50分别称取琼脂糖、纳米四氧化三铁、氯化钠和去离子水，超声混合并加热融化琼脂糖，制得水相；2)按照质量比5∶30∶1称取水相、真空泵油和聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯80(吐温80)混合，70℃下高速搅拌进行乳化2小时，置于冰水浴中降温，收集微球；3)按照质量比2∶2∶1称取微球、1M的氢氧化钠和环氧氯丙烷混合，室温振荡反应1小时，添加0.1倍微球质量的硼氢化钠，室温振荡反应8小时，得到交联的磁性微球；4)按照质量比2∶2∶1∶1称取交联的磁性微球、去离子水、烯丙基溴和氢氧化钠，室温振荡活化24小时，水洗，加入1倍微球质量的N‑溴代丁二酰亚胺及3倍微球质量的去离子水，室温振荡反应1小时，水洗得到活化的磁性微球；5)按照质量比2∶1∶3称取活化的磁性微球、4‑氨基吲哚以及pH12的0.1M碳酸钠缓冲液，室温振荡8小时，水洗，加入2倍微球质量的乙醇胺中，室温振荡反应2小时，得到偶联有4‑氨基吲哚的磁性微球；6)将微球与pH6‑8的磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠平衡缓冲液在具塞三角瓶中振荡混合，进行预平衡，用磁铁在三角瓶外壁吸住微球，倾倒掉平衡缓冲液；7)按照每克微球加入10‑100ml细胞液比例加入细胞液，振荡混合10‑20分钟，用磁铁在三角瓶外壁吸住微球，倾倒掉细胞液；8)按照每克微球加入20ml平衡缓冲液比例加平衡缓冲液，振荡混合1‑5分钟，用磁铁在三角瓶外壁吸住微球，倾倒掉平衡缓冲液，完成微球的冲洗；9)按照每克微球加入10ml缓冲液比例加入pH3‑5的柠檬酸钠缓冲液作为解吸缓冲液，振荡混合3‑5分钟，用磁铁在三角瓶外壁吸住微球，收集解吸缓冲液，得到抗体溶液；所述的磁性微球其基质为包裹纳米四氧化三铁的多孔琼脂糖微球，配基为经烯丙基溴活化后偶联的4‑氨基吲哚，配基密度为100‑200μmol/ml。