[发明专利]陆地棉特异性PCR引物对及其在植食性昆虫体内的检测方法

摘要

本发明提供陆地棉特异性PCR引物对，其是根据GenBank中公布的陆地棉rbcL序列(HQ901197.1)设计的一对特异性引物，该引物对特异性强，仅对陆地棉具有扩增能力，而对同域的其他物种无扩增产物。本发明还提供利用该引物对检测植食性昆虫体内微量陆地棉的方法。采用本发明提供的方法和引物检测陆地棉，准确性高，操作简单、快速、高效，一般可在5个小时内完成检测，且具有较高的灵敏度，质粒浓度检出限为4.21E+04。利用该引物对检测植食性昆虫，可以辨别昆虫是否对棉花进行了取食。本发明采用PCR技术，提高了检测准确性，节约了检测时间，适于基层推广应用。

主权项

1.检测植食性昆虫体内微量陆地棉的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)用CTAB法提取待测昆虫总DNA；2)以步骤1)提取的DNA为模板，利用引物MraF1和MraR1进行PCR扩增反应；3)分析PCR产物；其中，PCR反应体系以20μL计为：PCR反应条件为：95℃10分钟；95℃30秒，58℃30秒，72℃60秒，共40个循环；72℃5分钟；所述引物MraF1和MraR1如下：正向引物MraF1：5'‑CGACATTGAGCCCGTTCCTG‑3’反向引物MraR1：5'‑GCGACCATACTTGTTCAA‑3’；其中，所述植食性昆虫包括棉蚜、烟粉虱、苜蓿盲蝽、绿盲蝽、三点盲蝽、中黑盲蝽、大草蛉、中华草蛉、双代盲蝽茧蜂、棉蚜茧蜂、七星瓢虫、异色瓢虫、龟纹瓢虫、棉铃虫。