[发明专利]超高效液相色谱串联质谱检测血清25羟基维生素D的方法

摘要

本发明提供了一种高灵敏高通量超高效液相色谱串联质谱仪检测25羟基维生素D的方法。向血清样品中加入25羟基维生素D的内标物，加入硫酸锌溶液和甲醇溶液进行蛋白沉淀；充分混匀后加入正己烷溶剂萃取；再充分混匀后离心，接着移取上清液并进行氮气吹干，加入复溶液，得到待测样品；对待测样品用超高效液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测；以25羟基维生素D₂和/或25羟基维生素D₃的定量离子对及定性离子对的保留时间为定性依据，采用内标标准曲线法定量。本发明前处理简单，特异性、抗基质干扰能力强；检测时间短，通量高，检测精密度、灵敏度高，成本低廉。

主权项

超高效液相色谱串联质谱检测血清25羟基维生素D的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)向血清样品中加入体积为血清样品体积1/15至2/15的25羟基维生素D的内标物，加入硫酸锌溶液和甲醇溶液进行蛋白质沉淀；充分混匀后加入正己烷溶剂萃取；再充分混匀后离心，得到上清液和沉淀，移取上清液后用氮气吹干沉淀，再加入复溶液，得到待测样品；所述25羟基维生素D内标物包含⁶d‑25羟基维生素D₂和/或⁶d‑25羟基维生素D₃；所述复溶液为甲醇和水按7：(2—4)的体积比混合的混合液；其中，所述血清样品、硫酸锌溶液、甲醇溶液、正己烷溶剂的体积比为1:(0.8—1.2):(1.8—2.2):(4—6)；所述复溶液与血清样品的体积比为1:(1.8—2.2)；(2)对待测样品用超高效液相色谱串联四级杆质谱仪进行检测。