[发明专利]小麦黄花叶病毒双抗夹心生物素-亲和素ELISA检测方法及应用

摘要

本发明公开了一种小麦黄花叶病毒双抗夹心生物素-亲和素ELISA检测方法及应用。结合生物素-亲和素系统的高度放大作用和抗原-抗体识别的特异性，建立了一种用于检测小麦黄花叶病毒的新的检测方法。该检测方法检测小麦黄花叶病毒的灵敏度高于ELISA，与RT-PCR比较灵敏度略低，但特异性一致，因此可有效地应用于田间小麦黄花叶病毒的早期诊断和监测。该方法因高度的灵敏度和特异性而减少抗体的用量，大大节约了检测成本；生物素-亲和素的偶联放大作用，大大提高了特异和准确性；另可操作性强适用于推广应用，从而为小麦病毒病的诊断、检测及科学防控提供了技术支撑。

主权项

一种小麦黄花叶病毒双抗夹心生物素‑亲和素ELISA检测方法，包括以下步骤：1)每孔用100uL病毒特异性抗体包被酶标板，37℃放置2h后，4℃过夜放置，洗板，甩干；2)每孔加入200uL含10％小牛血清的磷酸盐缓冲液，37℃孵育2h，洗板，甩干；3)每孔分别加入100uL待检病毒样品、阳性和阴性样品，37℃孵育1h，洗板，甩干；4)每孔加入100uL生物素标记的二抗，37℃孵育1h，洗板，甩干；5)每孔加入100uL亲和素标记的酶，37℃孵育1h，洗板，甩干；6)每孔加入100uL显色底物，37℃孵育5～15min进行显色反应，肉眼观察显色后每孔加入100uL终止液，用酶标仪测定OD值，以大于等于阴性对照OD值3倍的作物阳性结果的阈值。