[发明专利]一种环氧化物水解酶突变体及其制备方法

摘要

本发明公开一种环氧化物水解酶突变体及其制备方法，环氧化物水解酶突变体是将如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第8位、第26位、第83位、第90位和第122位的氨基酸进行单点突变或多点突变获得。制备方法：将编码环氧化物水解酶的基因克隆到质粒pET28a(+)中，构建重组质粒pET28a(+)‑EH；采用滚环PCR扩增质粒pET28a(+)‑EH，得到含有编码环氧化物水解酶突变体的基因序列的开环重组载体；将含有编码正确突变体的基因的PCR反应液转化感受态大肠杆菌DH5α，挑取正确复制子，并提取正确突变质粒；转化大肠杆菌BL21(DE3)，诱导表达。与野生型环氧化物水解酶相比，本发明环氧化物水解酶具有极高的温度稳定性和pH值适应范围，可以大大提高工业化生产中环氧化物水解酶的使用寿命。

主权项

1.一种环氧化物水解酶突变体，其特征在于，所述环氧化物水解酶突变体是将如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第8位、第26位、第83位、第90位和第122位的氨基酸同时进行突变获得；将SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的第8位的天冬氨酸替换为赖氨酸，同时第26位的苯丙氨酸替换为缬氨酸或色氨酸，同时第83位的异亮氨酸替换为精氨酸，同时第90位的丝氨酸替换为精氨酸，同时第122位的谷氨酰胺替换为精氨酸。