[发明专利]高通量转录组文库构建方法在审
| 申请号： | 201510408114.4 | 申请日： | 2015-07-11 |
| 公开（公告）号： | CN105019034A | 公开（公告）日： | 2015-11-04 |
| 发明（设计）人： | 洪旭涛;余文菁;谭海芹;宓娅娜 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C12N15/10 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高通量转录组文库构建方法，包括以下步骤：1)、从总RNA中分离mRNA；2)、将mRNA打碎成片段；3)、对片段化后的mRNA加poly A尾：利用polyA聚合酶以及ATP，在片段化的mRNA的3’端加上碱基A；4)、逆转录生成单链cDNA：设计一条带有polyT以及两段特异性序列的引物，与mRNA的polyA结合，并逆转录，加热变性后生成单链cDNA；5)、单链cDNA的环化：在单链DNA连接酶的作用下，单链cDNA环化，生成一个环；6)、PCR富集，文库构建：利用环上的两段特异性序列，设计两段特异性引物，通过一轮PCR，制备转录组文库。 | ||
| 搜索关键词： | 通量 转录 文库 构建 方法 | ||
【主权项】：
高通量转录组文库构建方法，其特征是：逆转录生成单链cDNA时所用的特异性引物为带有polyT以及两段特异性序列的引物，所述特异性引物为：3'‑(T)16‑TCTAGCCTTC TCGTGTGCAG‑GTGCTGCGAG AAGGCTAGA‑‑5'。
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