[发明专利]鱼类总基因组DNA的提取方法

摘要

本发明涉及一种鱼类总基因组DNA的提取方法，包括以下具体步骤：A.取含有DNA的鱼类组织，清净粉碎放入离心管中；B.加入Chelex-100溶液，沸水浴15～20min；加入蛋白酶K溶液，50～60℃水浴3h以上；C.吸取离心管中的液体置于另一个离心管中进行离心分离；D.取上清液，加入RNase溶液，37℃水浴45min以上；E.加入Tris饱和酚溶液，混匀后进行离心分离，取上清液；F.加入适量的氯仿和异戊醇混合液，混匀后进行离心分离，取上层溶液；G.加入乙醇，放置1h以上；H.离心分离，弃上清液；I.加入乙醇，进行离心分离，弃上清液；J.去除乙醇后，加入无菌水，保存备用。本发明的提取方法试剂方便易取，提取DNA效果好，DNA完整度高，尤其可以以鱼鳞为原材料进行提取，不受样品量限制。

主权项

一种鱼类总基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下具体步骤：A.取适量含有DNA的鱼类组织，清净粉碎后放入离心管中；B.向离心管中加入适量的Chelex‑100溶液，沸水浴15～20min；再加入适量的蛋白酶K溶液，50～60℃水浴3h以上；C.吸取离心管中的液体置于另一个离心管中进行离心分离；D.取上清液置于另一个离心管中，加入适量的RNase溶液，37℃水浴45min以上；E.向离心管中加入适量的Tris饱和酚溶液，混匀后进行离心分离，并取上清液置于另一个离心管中；此步骤进行1～3次；F.向离心管中加入适量的氯仿和异戊醇混合液，混匀后进行离心分离，并取上层溶液置于另一个离心管中；此步骤进行1～3次；氯仿和异戊醇混合液是氯仿与异戊醇按体积比为24:1混合而成；G.向离心管中加入适量的乙醇溶液，4℃放置1h以上，使得DNA沉淀；H.对离心管进行离心分离，弃上清液；I.向离心管中加入适量的乙醇溶液，进行离心分离，弃上清液；此步骤进行1～3次；J.去除乙醇后，加入适量的无菌水将DNA溶解，‑20℃保存备用。