[发明专利]一种同时检测金黄色葡萄球菌和阪崎克罗诺杆菌的试剂盒及其使用方法

摘要

本发明公开了一种同时检测金黄色葡萄球菌和阪崎克罗诺杆菌的试剂盒及其使用方法，具有快速、可靠、灵敏度高、特异性强的特点，通过一次反应能同时完成金黄色葡萄球菌和阪崎克罗诺杆菌的定性和/或定量检测。

主权项

1.一种试剂盒的非疾病诊断的使用方法，其特征在于：用于金黄色葡萄球菌和阪崎克罗诺杆菌的同时定量检测：所述试剂盒包括如序列SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示的引物和探针，其中，SEQ ID No.1和SEQ ID No.2分别为检测金黄色葡萄球菌nuc基因的引物对；SEQ ID No.3和SEQ ID No.4分别为检测阪崎克罗诺杆菌MMS基因的引物对；SEQ ID No.5为检测检测金黄色葡萄球菌nuc基因的探针；SEQ ID No.6为检测阪崎克罗诺杆菌MMS基因的探针；还包括如下的双重荧光PCR反应体系：PCR反应通用预混液，包括：及：所述方法包括：1)对样品提取细菌DNA作为模板DNA；2)制备如序列SEQ ID No.1至SEQ ID No.6所示的以金黄色葡萄球菌nuc基因和阪崎克罗诺杆菌MMS基因为靶基因的引物和探针；3)配制双重荧光PCR反应体系；4)将双重荧光PCR反应体系在荧光定量PCR仪上进行核酸扩增反应，反应结束后，根据探针标记的荧光报告基团记录的荧光信号，读取并记录各检测样品达到预设荧光阈值所需的PCR扩增循环数Ct值；5)根据各样品的Ct值，按照建立的定量判断标准，判断样品中是否含有金黄色葡萄球菌和阪崎克罗诺杆菌及其污染量；所述定量判断标准为：建立以10倍梯度递进稀释的各浓度菌液样品的Ct值与菌液浓度对数值之间的标准曲线，以未知样品Ct值套入标准方程求得其菌液浓度。