[发明专利]一种血小板跨膜电位检测方法

摘要

本发明涉及一种血小板跨膜电位检测方法，步骤为取洗涤后的血小板样品用含氯化钙的Hepes‑Tyrodes buffer重新悬浮稀释，加入流式管，记为F；另取洗涤后的血小板样品用氯化钾为120‑150mmol/L，氯化钠为2‑20mmol/L的Hepes‑Tyrodes buffer重新悬浮稀释，加入流式管，记为F0；向F0流式管中加入终浓度为0.1‑5μg/L的短菌杆肽；向F和F0流式管加入终浓度为10‑200nmol/L DiBAC4(3)，染色；上机检测；根据修正后的能斯特方程计算结果。该方法血小板破坏少，灵敏度高，重复性好，充实了现有的血小板保存质量评估方法，能够预判血小板储存损伤。

主权项

一种血小板跨膜电位检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a)血小板原液样品离心，弃上清，洗涤；b)取部分经步骤a)处理的血小板样品，使用含0.8‑5mmol/L氯化钙且氯化钾含量为1‑6mmol/L的Hepes‑Tyrodes buffer重新悬浮血小板，稀释血小板至5～10×109/L，加入流式管，记为F；另取部分经步骤a)处理的血小板样品，使用氯化钾含量为120‑150mmol/L且氯化钠含量为2‑20mmol/L的Hepes‑Tyrodes buffer重新悬浮血小板，稀释血小板至5～10×109/L，加入流式管，记为F0；c)向F0流式管中加入终浓度为0.1‑5μg/L的短菌杆肽溶液，使细胞完全去极化；d)向F和F0流式管加入终浓度为10‑200nmol/L DiBAC4(3)溶液，轻轻震荡，混匀，暗室室温染色15‑60min；e)流式上机检测；根据修正后的能斯特方程：V＝Edye＝‑(RT/ZF)*ln(F/F0)，计算血小板跨膜电位，其中，F0代表细胞完全去极化时的荧光值，F代表细胞处于静息状态下的荧光值。