[发明专利]一种biotin-avidin-慢病毒表达载体和CAR-T细胞制备方法及可视化方案

摘要

本发明提出了一种biotin-avidin-慢病毒表达载体和CAR-T细胞制备方法，以解决传统CAR-T的靶向性单一、制备繁琐、耗时费力、经济性差的缺点。该方法通过构建avidin-CAR慢病毒包装载体；病毒包装；T细胞分离、激活、共刺激结构域基因转导、扩增来制备CAR-T细胞。并在通用型CAR-T治疗系统基础上，引入分子影像学检测手段，提出了一种基于该细胞的可视化治疗方案，可以实时、动态、在体监控CAR-T细胞治疗过程，从而解决目前CAR-T细胞在治疗过程中缺乏有效监控的现状。本发明具有制备简易、选择多样、靶标广泛、治疗过程可视化的优点，适用于肿瘤患者的治疗。

主权项

一种biotin‑avidin‑慢病毒表达载体和CAR‑T细胞制备方法，其特征在于：该方法主要包括三步，第一步，构建avidin‑CAR慢病毒包装载体；第二步，病毒包装；第三步，T细胞分离、慢病毒感染(共刺激结构域基因转导)、激活及扩增；其中，制备avidin‑CAR慢病毒表达载体是通过基因工程手段，将其表达于癌症患者外周血中分离收集的T细胞以获得avidin‑CAR‑T细胞；该基因工程改造的T细胞相对于传统的CAR‑T细胞的不同之处在于：以avidin蛋白的表达替代传统CAR上与抗原结合的蛋白功能区(如：scFv)。