[发明专利]一种促进目标蛋白胞外表达的方法及其应用

摘要

本发明公开了一种促进目标蛋白胞外表达的方法及其应用，属于生物工程技术领域。是将Bacillus cereus磷脂酶C和目标蛋白(包括胞内定位蛋白和胞外定位蛋白)在大肠杆菌中共表达，可提高胞外定位目标蛋白生产强度，实现胞内定位目标蛋白胞外表达，提高生产效率、简化后提取工艺，具有较高的学术意义和应用价值。

主权项

1.一种促进目标蛋白胞外表达的方法，其特征在于，所述方法是将氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示的磷脂酶C基因和目标蛋白基因在大肠杆菌表达系统中共表达；所述方法具体是：将磷脂酶C基因和目标蛋白基因克隆到表达载体上，得到重组质粒，然后将重组质粒转化到宿主菌中得到重组大肠杆菌，重组大肠杆菌发酵培养生产目标蛋白，收集发酵上清液；所述发酵培养具体是：将种子以5‑10％的接种量接种，诱导前培养温度为25‑37℃，诱导后培养温度25‑37℃，pH 6.5‑7.5，溶氧20‑30％；当发酵初始碳源甘油基本消耗完时，开始流加补料液，所述补料液按指数流加，比生长速率控制在μ＝0.1‑0.3h‑1；当菌体干重3‑10g·L‑1时，加入5‑15g·L‑1甘氨酸；菌体干重15‑25g·L‑1时，开始诱导，诱导方法为恒速流加乳糖，乳糖加量0.05‑0.5g·L‑1·h‑1，测定菌体干重和培养基中酶活变化，培养基中酶活不再上升时，发酵过程结束。