[发明专利]一种快速鉴定产生长素的植物内生细菌的方法

摘要

本发明属于微生物技术领域，涉及一种快速鉴定产生长素的植物内生细菌的方法；包括以下步骤（1）培养基及显色液的配制所用的培养基为含色氨酸浓度0.5‑2 g/L的改良的R2A分离鉴定培养基，生长素显色液为2 mL的0.5 M氯化铁溶液以及98 mL的体积分数为25~35%的高氯酸混匀；（2）植物组织的预处理用体积分数为70~75%的乙醇和5~8%的次氯酸钠溶液分别浸泡后，用蒸馏水冲洗；（3）产生长素内生细菌的鉴定；本发明将分离培养基与产生长素鉴定培养基改良整合，在培养基中添加生产生长素的前体色氨酸，在分离菌株后立即施用生长素显色液，在5~10 min内快速辨别出产生长素的内生细菌；简化鉴定工序，操作方便，缩短时间，是一种能简单、快速、有效鉴定产生长素内生菌的方法。

主权项

一种快速鉴定产生长素的植物内生细菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）培养基及显色液的配制：配制含有不同色氨酸浓度的改良的R2A分离鉴定培养基和生长素显色液；其中改良的R2A分离鉴定培养基每1L含0.5~2g色氨酸；（2）植物组织的预处理：选取生长良好的植物组织用蒸馏水冲洗干净后，置于无菌操作台中进行植物组织的表面消毒；然后用剪刀将植物组织边缘剪去，露出新鲜切口，并将切口贴在已倒好的改良R2A分离鉴定培养基上，将培养皿封口放入30 ℃的培养箱中暗培养；（3）产生长素的内生细菌的分离与快速鉴定：将植物组织切口附近生长出的单一植物内生细菌菌落标上序号，用接种环蘸取不同序号菌体，用划线培养法得到单菌落；之后立即在长内生细菌的植物组织切口周围喷施生长素显色液，在30 ℃中进行暗反应，观察周围有粉红色物质产生的菌落，此即是可产生长素的内生细菌；步骤（1）中所述的改良的R2A分离鉴定培养基配方如下：称取0.5 g酵母提取物、0.5 g胰蛋白胨、0.5 g酪蛋白酸水解物、0.5 g葡萄糖、0.5 g可溶性淀粉、0.3 g磷酸二氢钾、0.024 g无水硫酸镁、0.3 g丙酮酸钠、15 g琼脂粉、0.5~2 g色氨酸，用双蒸水定容至1 L，并调pH至7.2，配成改良的R2A分离鉴定培养基，经115℃高压灭菌15 min后，分装倒入无菌培养皿中，冷却备用。